[发明专利]植物乳杆菌KLDS1001及其在抑制口腔变异链球菌中的用途

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，涉及一株具有潜在口腔益生功能的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)及其应用。

背景技术

发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)Y29对口腔变异链球菌具有一定的抑制作用；对口腔内溶菌酶和过氧化氢具有一定的耐受性，能够适应口腔环境。但是，没有关于菌株的产酸能力和致龋能力的相关分析，菌株能够产生胞外多糖，具有一定的齿表面粘附能力，是潜在的致龋菌。

植物乳杆菌HO-69具有较弱的齿表面粘附能力，对口腔粘膜的粘附能力较强，非酸抑菌物质对变异链球菌具有抑菌作用并具有广谱的抑菌效果。但是，缺少对于菌株应用安全性的评价，没有对抗药性，引起粘膜感染的特性进行研究。

发明内容

本发明的目的是提供一株对口腔变异链球菌具有抑制作用的植物乳杆菌KLDS1001及其应用。

本发明提供的植物乳杆菌KLDS1001，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所，其菌种保藏编号为：CGMCC No.9066，保藏日期为2014年04月16日，菌种的分类命名为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。KLDS1001为革兰氏阳性短杆菌，成对或成链状排列。于MRS平板培养后，菌落呈白色，圆形，枕状光滑，边缘整齐。其菌体和菌落形态特征如图1-3所示。

本发明提供的植物乳杆菌KLDS1001对变异链球菌的抑菌圈直径为19.47±0.50mm，与国内和国际上的研究相比抑菌活性较好。通过测定植物乳杆菌KLDS1001对变异链球菌在玻璃试管表面形成菌膜的影响，比较直观的发现，菌株可以有效的降低变异链球菌在菌膜当中的数量。从以上体外实验的结果来看，菌株能够有效的抑制变异链球菌的生长并减少口腔菌斑中变异链球菌的数量。与传统益生菌株LGG相比，本发明提供的植物乳杆菌KLDS1001抑菌能力较强，抑制变异链球菌菌膜形成的能力相近。

本发明提供的植物乳杆菌KLDS1001能够在pH为3-5的条件下保持良好的生长状态，在pH为2的条件下培养1h后保持4.79±0.49logcfu的活菌数，说明菌株能够较好的适应由于进食引起的口腔内pH的变化；菌株在过氧化氢浓度为1mM/L的条件下生长良好，在5mM/L的条件下培养6h后，存活的菌数为3.29±0.07logcfu对口腔内和口腔清洁用品中的过氧化氢具有较强的耐受性，能够较好的适应口腔环境。

作为新的口腔益生菌，乳酸菌在应用的过程中可能具有以下危害：(1)由于具有较强的产酸能力而具有一定的致病性；(2)可能携带耐药性基因，存在耐药性基因水平转移的危害；(3)可能引起口腔粘膜的感染。植物乳杆菌KLDS1001培养72h分解羟磷灰石产生钙的量为0.29±0.02μg/mL，仅具有轻微的降解能力，此降解量与传统益生菌LGG相似(0.27±0.01μg/mL)，说明菌株分解牙釉质导致龋齿的能力弱。菌株不具有溶血性，不能引起口腔内粘膜的感染。菌株对万古霉素、克林霉素和链霉素具有耐药性。

本发明提供的植物乳杆菌KLDS1001可以作为口腔保健品，如：口香糖，保健药品的一种添加成分，用于口腔保健；可以作为口腔清洁产品的成分之一，添加到牙膏、漱口水当中，用于口腔清洁和减少口腔中变异链球菌的数量；开发益生菌疗法用于预防和治疗龋齿等口腔疾病。

保藏信息：

保藏单位全称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；

保藏单位简称：CGMCC；

保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所；

保藏日期：2014年04月16日；

保藏编号：CGMCC No.9066。

附图说明

图1为KLDS1001菌落形态；

图2为KLDS1001菌落于高倍显微镜下观察形态；

图3为KLDS1001革兰氏染色后菌体形态；

图4为菌株KLDS1001与LGG对变异链球菌菌膜形成的影响，菌株KLDS1001与LGG能够有效的抑制变异链球菌菌膜形成，并且筛选菌株和益生菌LGG具有相似的抑菌能力；

图5为菌株KLDS1001、LGG和变异链球菌对羟磷灰石的降解能力，菌株KLDS1001与LGG均具有较弱的羟磷灰石降解能力；

图6为不同pH对菌株KLDS1001生长的影响；