[发明专利]一种用于诊断和治疗乙型肝炎的短肽及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽类药物，具体涉及一种可标记并结合乙型肝炎病毒的短肽及其修饰标记系列。

背景技术

慢性乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)引起的、世界范围流行的重大疾病，目前全球约4亿人感染HBV。慢性乙型肝炎可随病程发展，恶化为肝硬化和原发性肝癌，引起患者死亡。虽然有报道称，已有多种抗HBV药物(如干扰素及核苷类似物)可以有效抑制病毒复制、抑制病情恶化或治愈慢性乙肝，但是由于HBV具有多种基因型和血清型，以上药物在整体治疗效果及治愈率上无法令人满意。治愈慢性乙型肝炎急需新型抗HBV药物及策略。

多肽疫苗作为一种新型生物技术疫苗，已经在多个人类疾病领域进行深入的研究。目前在慢性乙型肝炎领域，通过噬菌体展示技术筛选得到许多可以与HBV颗粒或主要抗原相结合的多肽，但其抗病毒效果欠佳。现有的HBV结合肽，大多源自噬菌体展示技术，长度约10-20个氨基酸残基，它们虽然可以结合HBV颗粒，但在细胞水平上对病毒复制增殖的影响很小。

此外，由于HBV基因组结构的特殊性，通过基因重组技术标记HBV仍存在很多困难，这在很大程度上限制了HBV感染机制的研究进展。修饰与标记的多肽系列结合HBV颗粒后，间接地标记病毒，对HBV感染机制研究具有实际的应用价值。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术存在的上述不足，提供一种能结合乙型肝炎病毒(HBV)颗粒、并抑制病毒复制增殖的短肽。本发明短肽与HBV颗粒具有高度结合能力，显著地抑制了HBV在肝细胞中的复制增殖。而且，该短肽进行多种修饰(C端酰胺化、醛基化、醇基化几N端糖基化、烷基化)和标记(N端生物素、FITC、罗丹明标记)后，不但保留了结合HBV颗粒的能力，还起到了间接标记病毒的作用，例如，该短肽经与7个精氨酸和绿色荧光标记(FITC)线性串联后形成的修饰与标记系列。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种用于治疗乙型肝炎的短肽T4，其氨基酸序列为：丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸-丙氨酸。

T4可通过本领域常规方法合成。

本发明中：

HepG2细胞：人肝癌细胞系，不能产生HBV；HepG2.2.15细胞：与HepG2细胞同源，可自行产生HBV颗粒；细胞穿透肽R7：为线性、连续的7个精氨酸(R)，可以携带其他多肽高效地穿透细胞膜，并且对细胞没有损伤；异硫氰酸荧光素(FITC)：在分子生物学研究中常用的一种绿色荧光标记物。

本发明的优点是：短肽T4与现已报道的其他HBV结合肽均不一样，其特点在于：结构更加简单、序列更加短小，仅为线性的4个氨基酸残基；可与HBV颗粒高亲和地结合；T4经标记与修饰(与7个精氨酸和绿色荧光标记形成线性串联系列)后，不仅在细胞水平上表现出抗病毒效果，而且对HBV具有标记作用。这与已知的其他HBV结合肽均不相同，在新型抗乙肝多肽药物开发和HBV感染机制研究中具有重要意义。

附图说明

图1是多肽混合物T20与HBV颗粒的结合能力图，

图2是T20各组分与HBV颗粒的结合能力图，

图3是修饰的短肽T4导入HepG2细胞和HepG2.2.15细胞图，

图4是加入不同浓度修饰的短肽的病毒产量的变化图，

图5是10mM修饰的短肽对病毒产量的抑制作用图，

图6是25mM修饰的短肽对病毒产量的抑制作用图。

具体实施方式

实施例1：

1、合成多肽混合物T20(由上海吉尔生化有限公司合成)，并通过ELISA方法进行验证；