[发明专利]猪圆环病毒2型IgM抗体胶体金免疫层析检测试纸卡及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测试纸卡及其制备方法，具体涉及一种猪圆环病毒2型IgM抗体胶体金免疫层析检测试纸卡及其制备方法和应用。

背景技术

猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2，PCV2）感染，可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征，母猪繁殖障碍等疾病，以病畜生长缓慢消瘦、多系统损伤为主要特征，该病毒自发现以来在全世界广泛存在，给全球养猪业造成巨大经济损失。因此，建立血清学抗体检测方法，对评价猪群的免疫水平和感染状况具有重要意义，而检测猪圆环病毒2型 IgM抗体为该病的早期诊断提供了新的诊断方法。

PCV ORF2开放阅读框编码病毒核衣壳蛋白（Cap蛋白），是病毒的主要结构蛋白，具有四个抗原表位，是特异性抗体检测理想的靶抗原。因此，特异性检测PCV Cap蛋白IgM抗体可以对猪群PCV2感染情况作出早期诊断，有效降低经济损失。

本病的检测方法主要有间接免疫荧光、PCR等，虽然这些方法可以检测PCV2抗原或IgG抗体水平，但很少检测IgM抗体，已有检测IgM抗体试剂盒不能区分特异性PCV2 IgM抗体；而且这些方法存在操作复杂、需要专门仪器和人员、检测时间长等缺点。胶体金免疫层析方法是在免疫渗滤的基础上发展起来的快速检测方法，该方法操作简单、重复性好、灵敏度高，结果快速直观、并可大量制备，工艺简单、成本低廉，适合基层大批量现场检测，因此，利用胶体金免疫层析方法特异性检测PCV Cap蛋白IgM抗体可作PCV2感染早期快速诊断。

发明内容

本发明的首要目的在于弥补现有检测技术的缺点与不足，提供一种猪圆环病毒2型IgM抗体胶体金免疫层析检测试纸卡。该检测试纸卡将样品吸收区纯化的猪圆环病毒2型Cap蛋白作为检测抗原，特异性结合待检血清中的猪圆环病毒2型Cap蛋白的IgM抗体，再结合胶体金标记抗猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体，利用固化抗体区检测线处包被的鼠抗猪IgM单克隆抗体进行捕获，夹心法进行猪圆环病毒2型IgM抗体的检测。

本发明的另一目的在于提供上述猪圆环病毒2型IgM抗体胶体金免疫层析检测试纸卡的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述猪圆环病毒2型IgM抗体胶体金免疫层析检测试纸卡

卡在猪群PCV2早期感染诊断中的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种猪圆环病毒2型IgM抗体胶体金免疫层析检测试纸卡，包括样品吸收区、金标探针区、固化抗体区、吸水区、底板和卡壳，样品吸收区、金标探针区、固化抗体区和吸水区依次粘贴于底板并相互重叠装入卡壳内；所述的样品吸收区包被有纯化的猪圆环病毒2型Cap蛋白，包被量优选为10～50μg；所述的金标探针区包被有金标探针，所述的金标探针为胶体金标记的抗猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体，其标记量优选为1～30μg/mL，包被量优选为10～50μL/cm；固化抗体区依次有检测线T和对照线C，检测线T包被有鼠抗猪IgM单克隆抗体，包被量优选为0.1～10μg/cm，对照线C包被有羊抗鼠IgG，包被量优选为0.1～10μg/cm。

所述的样品吸收区的材料为聚酯纤维膜；所述的金标探针区的材料为玻璃纤维膜；所述的固化抗体区的材料为硝酸纤维素膜；所述的吸水区的材料为吸水滤纸；所述的底板的材料为聚乙烯板；所述的卡壳为带可视窗和样品孔的塑料卡壳。

上述猪圆环病毒2型IgM抗体胶体金免疫层析检测试纸卡的制备方法，包括如下步骤：将纯化的猪圆环病毒2型Cap蛋白包被于聚酯纤维膜上；将胶体金标记的抗猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体喷涂于玻璃纤维膜上；将鼠抗猪IgM单克隆抗体包被于硝酸纤维素膜检测线T处，将羊抗小鼠IgG包被于硝酸纤维素膜对照线C处；将聚酯纤维膜、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水滤纸组装到聚乙烯板上，装入卡壳内，得到猪圆环病毒2型IgM抗体胶体金免疫层析检测试纸卡。

优选的，所述的猪圆环病毒2型IgM抗体胶体金免疫层析检测试纸卡的制备方法，包括如下步骤：

（1）纯化的PCV2-Cap蛋白的制备：

利用杆状病毒表达系统构建表达PCV2-ORF2基因的重组杆状病毒，根据PCV2的基因序列设计Cap蛋白特异性引物，引物序列为：

上游引物1：5^，-TCTGGATCCATGACGTATCCAAGGAGGCG-3^，，