[发明专利]一种具有组织学结构的人工食道的制备方法

说明书

技术领域

 本发明涉及组织工程学领域，尤其涉及一种具有组织学结构的人工食道的制备方法。

背景技术

正常的人体食道为一约20～25厘米长、直径约1.9厘米（因个体而异）的中空管道，连接咽喉和胃部，担负着将食物从咽喉输送到胃的功能。从组织学的角度，食管由粘膜、粘膜下层、肌层和外膜等四层构成，其中粘膜和肌层是最重要的功能成分。如粘膜是一渗透性屏障层，对食管内部组织起保护和隔离作用；粘膜下层中含有管状腺，使得粘膜表面始终保持润滑，以减少食物通过时的摩擦，使食物能在不损伤食管的前提下被输送至胃部；而肌层含有明显的内环行和外纵行复层结构，通过肌细胞的收缩和蠕动实现食物的运送功能；而粘膜的底层是基膜，这是一薄层储有生长因子、某些特殊蛋白及其它营养物质的细胞外基质，具有影响和调节上皮细胞的粘附、增殖、迁移、分化以及死亡等功能。经检测，基膜厚约50～150nm、由直径为28～166nm的纤维和大小不均的孔组成的网状结构。基膜中含有IV型胶原、层粘连蛋白、巢蛋白和蛋白聚糖等功能蛋白。

人体食道病变时有发生，有先天带来的也有后天变异的。尤其食道癌已成为世界第五大恶性肿瘤。而且在食道癌患者中调查发现，食道癌的好发部位为食道中下段，将近占到90%。这些食道疾病引起食道梗阻而不能进食，严重威胁人类生命健康。临床上对早期食道癌的治疗以手术切除、胃-颈段食道吻合为主，对于长段食道病变，以手术切除并重建替代为主。常用的替代物有两类：一类是自体其他组织或器官，如胃、空肠、结肠等，其中，国内食道替代手术中胃是最常用的替代品，但这些替代物以损伤修复损伤，同时治疗效果也不理想，如以胃替代病变食道的患者死亡率达7～20%，术后患综合症的高达50%以上；另一类替代物为塑料、橡胶、玻璃、聚乙烯、Teflon、钢丝圈等，这些非降解、非生物相容的替代物其缺点也是显而易见的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种模拟正常人体食道的组织学结构，利用组织工程学原理，在体外构建与人体食道具有相似微观构造和功能、能减轻病患痛苦、延长病患生命的具有组织学结构的人工食道的制备方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种具有组织学结构的人工食道的制备方法，具体包括以下步骤：

（1）、取动物食道中的粘膜及粘膜下层，洗净、剪碎，并将粘膜及粘膜下层组织浸入由NaCl、Tris-HCl（三羟甲基氨基甲烷）、苯甲基磺酰氟和N-甲基马来酰亚胺混合而成的溶液中，其中：NaCl在溶液中的浓度为3.4mol/L、Tris-HCl在溶液中的浓度为0.05mol/L、苯甲基磺酰氟在溶液中的浓度为2mmol/L、N-甲基马来酰亚胺在溶液中的浓度为1mmol/L，匀浆后将匀浆液在４℃的低温下以8000～12000r/min的转速离心20min，取离心后的上清液，并将离心后剩下的沉淀物再浸入由NaCl、Tris-HCl、苯甲基磺酰氟和N-甲基马来酰亚胺混合而成的溶液中，其中：NaCl在溶液中的浓度为0.5mol/L、Tris-HCl在溶液中的浓度为0.05mol/L、苯甲基磺酰氟在溶液中的浓度为2mmol/L、N-甲基马来酰亚胺在溶液中的浓度为1mmol/L，匀浆后将匀浆液在４℃的低温下以8000～12000r/min的转速离心20min，取离心后的上清液，并将离心后剩下的沉淀物接着浸入由盐酸胍、二硫苏糖醇和Tris-HCl混合而成的溶液中，其中：盐酸胍在溶液中的浓度为2.0mol/L、二硫苏糖醇在溶液中的浓度为2mmol/L、Tris-HCl在溶液中的浓度为0.05mol/L，匀浆后将匀浆液在４℃的低温下以8000～12000r/min的转速离心20min，取离心后的上清液，并将离心后剩下的沉淀物最后浸入由盐酸胍、二硫苏糖醇和Tris-HCl混合而成的溶液中，其中：盐酸胍在溶液中的浓度为4.0mol/L、二硫苏糖醇在溶液中的浓度为2mmol/L、Tris-HCl在溶液中的浓度为0.05mol/L，匀浆后将匀浆液在４℃的低温下以8000～12000r/min的转速离心20min，取离心后的上清液，将四次所取得的上清液混合，得到基膜蛋白液，用于支架包被；