[发明专利]负载蛋白、多肽类药物微球立体形态及分布的测定方法

权利要求书

1.一种负载蛋白、多肽类药物微球立体形态及分布的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)样品准备

将微球置于容器中，加入固定液，静置，使固定液完全渗透微球；弃去固定液，以磷酸盐缓冲液清洗微球，弃去磷酸盐缓冲液；加入乙醇清洗，脱去微球中的水；然后加入含染色剂的乙醇溶液，静置，确保染色剂完全浸透微球，并与微球中负载的蛋白、多肽类药物结合，再以磷酸盐缓冲液将未与蛋白、多肽类药物结合的染色剂清洗去除，得到待测微球样品；

2)Nano-CT断层扫描

将待测微球样品置于Nano-CT断层扫描设备中，调节光子能量为5-12keV，采用大视场模式扫描，设置单幅曝光时间为15-25秒，并以0.2°-0.8°的步长在-90°-+90°的角度内采集微球二维投影图像；

3)数据分割

对上述得到的微球二维投影图像进行重建，得到微球的不同截面图像，以预设的灰度阈值，将微球分割为蛋白、多肽类药物部分和微球骨架部分；

4)三维结构构建

以微球的截面图像进行三维重构，得到负载蛋白、多肽类药物微球的三维结构，并计算出微球的结构参数。

2.根据权利要求1所述的负载蛋白、多肽类药物的微球三维结构的构建方法，其特征在于，步骤1)样品准备中，所述固定液为中性甲醛溶液、戊二醛溶液、等渗甲醛醋酸溶液或碱性醋酸铝溶液。

3.根据权利要求1所述的负载蛋白、多肽类药物的微球三维结构的构建方法，其特征在于，步骤1)样品准备中，所述染色剂为醋酸铀、柠檬酸铅或四氧化锇。

4.根据权利要求1所述的负载蛋白、多肽类药物微球立体形态及分布的测定方法，其特征在于，步骤1)样品准备中，所述固定液为体积百分比含量为1.0％-4.0％的戊二醛水溶液；所述脱去微球中的水的方法为加入体积百分含量为10％-100％的乙醇溶液进行梯度清洗；所述染色剂为百分含量为1.5％-2.5％的醋酸铀，按每克微球0.8-1.2mL醋酸铀的加入量对蛋白质进行染色。

5.根据权利要求1所述的负载蛋白、多肽类药物微球立体形态及分布的测定方法，其特征在于，所述微球以聚乳酸类或聚乳酸-聚乙醇酸共聚物类材料为骨架。

6.根据权利要求1-5任一项所述的负载蛋白、多肽类药物的微球三维结构的构建方法，其特征在于，步骤2)Nano-CT断层扫描中，所述光子能量为6-10keV，所述单幅曝光时间为18-22秒，所述CT成像投影数据的采集步长为0.4-0.6°。

7.根据权利要求6所述的负载蛋白、多肽类药物微球立体形态及分布的测定方法，其特征在于，步骤3)数据分割中，对微球二维投影图像进行重建的方法为滤波反投影算法。

8.根据权利要求7所述的负载蛋白、多肽类药物微球立体形态及分布的测定方法，其特征在于，步骤3)数据分割中，所述灰度阈值为35-45，具体分割方法为：如灰度值小于等于该灰度阈值，则分割为蛋白、多肽类药物部分，如灰度值大于该灰度阈值，则分割为微球骨架部分。

9.根据权利要求1所述的负载蛋白、多肽类药物微球立体形态及分布的测定方法，其特征在于，步骤4)三维结构构建中，所述微球的结构参数为孔隙、孔隙率、孔隙连通率、蛋白、多肽类药物体积、药物体积占微球总体积的百分率、多肽类药物连通率、平均孔径及分布、平均孔径与微球直径比、闭合连通率、有效表面积中的至少一种。

10.根据权利要求1所述的负载蛋白、多肽类药物微球立体形态及分布的测定方法，其特征在于，步骤2)Nano-CT断层扫描中，所述微球的二维投影图像通过CCD图像传感器捕获。