[发明专利]一种桑叶中阿苯达唑持留量的测定方法

说明书

技术领域

本发明属于药物检测技术领域，具体涉及一种桑叶中阿苯达唑持留量的测定方法。

背景技术

中国蚕桑具有5000多年的历史，我国蚕丝及其丝绸制品的产销量约占世界总量的70％，是唯一可垄断世界贸易市场的出口商品。家蚕微粒子病因其具有胚种传染能力而对蚕种生产具有毁灭性的影响，是世界产丝国的检疫对象。近二十余年来，家蚕微粒子病在我国呈全国流行趋势，淘汰超毒蚕种量达数百万张，经济损失惨重。现有研究表明阿苯达唑是治疗家蚕微粒子病较理想的药物(杨琼，邢东旭，廖森泰等.家蚕微粒子病治疗药物的研究.广东蚕业，2010，44:35-37)。

阿苯达唑(albendazole，ABZ)是一种高效低毒，对线虫、吸虫及绦虫均具有较强驱防效应的苯并咪唑类药物，已被广泛应用于人体医学、畜禽养殖、水产养殖等多个领域。其在体内代谢为亚砜类或砜类后，抑制寄生虫对葡萄糖的吸收，导致虫体糖原耗竭，或抑制延胡索酸还原酶系统，阻碍ATP产生，使寄生虫无法存活和繁殖。目前，阿苯达唑作为饲料添加剂或配制成悬浊液喷洒桑叶是给家蚕喂食阿苯达唑的两种有效途径，对于广大蚕农而言，后者可操作性和经济性更强，更容易被接受。因此，喷洒在桑叶上阿苯达唑持留量的动态变化规律及其在桑叶上的药效期成为蚕桑业关注的焦点。然而，目前在阐明桑叶阿苯达唑持留量和药效随时间降解变化规律尚需要建立测定桑叶上阿苯达唑含量的方法。

早在20世纪80年代初，国外已有对不同生物材料中阿苯达唑及其代谢物残留量测定方法的研究报道，Alvinerie和Galtier(Alvinerie M,Galtier P.Simultaneous determination of albendazole and its principal metabolites in plasma by normal phase high-performance liquid chromatography.Journal of Pharmaceutical&Biomedical Analysis，1984，2：73-79)利用正向高效液相色谱实现了绵羊血浆中阿苯达唑及其代谢物的同时测定，使用的UV检测器灵敏度较低。到了21世纪初，国内外在人体医学、畜禽养殖、水产养殖等多领域对各种生物组织材料中丙硫咪唑或苯并咪唑类物质测定方法的研究报道也逐渐丰富起来，如免疫分析法、毛细管电泳法、气-质联用法，液-质联用法等。Kitzman等(Dennis K，Cheng K，Fleckenstein L，HPLC assay for albendazole and metabolites in human plasma for clinical pharmacokinetic studies.Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2002，30：801-813)利用C18固相萃取柱对含阿苯达唑的人体血样在HPLC上机前进行萃取，能有效祛除杂质、排除干扰；Mottier等(Mottier L，Alvarez L，Lanusse C，Quantitative chromatographic determination of several benzimidazole anthelmintic molecules in parasite material.Journal of Chromatography B，2003，798：117-125)也利用固相萃取柱、反向HPLC技术同时对绵羊、牛等绦虫寄主体内的苯并咪唑类药物含量进行了测定；林海丹等(林海丹，谢守新，吴映璇.固相萃取高效液相色谱法测定乳粉中苯并咪唑类药物残留.分析试验室，2005，24：27-29)建立了固相萃取高效液相色谱测定乳粉中苯并咪唑类药物残留的方法；刘勇军等(刘勇军，吴银良，姜艳彬，刘兴国，王海.固相萃取高效液相色谱法测定猪肉中六种苯并咪唑类药物残留的研究.食品科学，2009，30：212-214)也成功利用了固相萃取高效液相色谱法对猪肉中六种苯并咪唑类药物残留量进行了研究。这些已有的测定技术大多是通过固相萃取来达到待测物质与基体的分离纯化，然后利用高效液相色谱进行检测，这些方法均具有针对性强，灵敏度高和检测速率快的优越性。然而，由于植物基体组织与动物基体组织的成分差异，导致现有技术的固相萃取条件并不能实现植物基体组织中阿苯达唑的分离纯化，特别是桑叶中的黄酮类、生物碱和植物甾醇等成分会对阿苯达唑的检测产生严重的干扰，从而无法直接用高效液相色谱对桑叶基体组织中阿苯达唑的含量进行测定。

发明内容