[发明专利]一种真菌来源的木聚糖酶、其编码基因及其高效异源表达

权利要求书

1.一种分离的多肽，其特征在于，该多肽选自下组：

(a)具有SEQIDNO:2或第20-231位所示氨基酸序列多肽；

(b)由(a)所述的多肽经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有多肽(a)功能的多肽；或

(c)在(a)或(b)所述多肽的N或C末端添加标签序列，或在其N末端添加信号肽序列后形成的多肽。

2.一种分离的多核苷酸，其特征在于，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列选自下组：

(1)编码如权利要求1所述多肽的多核苷酸；

(2)与多核苷酸(1)互补的多核苷酸。

3.如权利要求2所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸编码如SEQIDNO:2所示氨基酸序列的多肽；较佳地，该多核苷酸的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。

4.一种载体，其特征在于，它含有权利要求2-3任一所述的多核苷酸。

5.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求4所述的载体，或其基因组中整合有权利要求2-3任一所述的多核苷酸。

6.如权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞是里氏木霉，其基因组中整合有权利要求2-3任一所述的多核苷酸。

7.如权利要求6所述的宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞中包括一构建物，该构建物从5’至3’依次包括以下操作性连接的元件：同源上臂，权利要求2-3任一所述的多核苷酸，终止子，同源下臂；

所述的同源上臂为里氏木霉cbh1基因ATG上游的启动子序列；

所述的同源下臂为里氏木霉cbh1基因TAG及TAG下游至少500bp；较佳地至少1000bp，如2000bp。

8.如权利要求7所述的宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞中包括所述的构建物，且还转化有权利要求4所述的载体。

9.一种权利要求1所述的多肽的制备方法，其特征在于，该方法包含：

(i)培养权利要求5-8任一所述的宿主细胞；

(ii)收集含有权利要求1所述的多肽的培养物；

(iii)从培养物中分离出权利要求1所述的多肽。

10.权利要求1所述的多肽的用途，其特征在于，所述的多肽用于水解β-1,4-木糖苷键。

11.如权利要求10所述的用途，其特征在于，所述的多肽水解的底物是木聚糖或含有木聚糖的物质；较佳地，将木聚糖或含有木聚糖的物质降解成低聚木糖、木寡糖或单糖。

12.一种用于降解木聚糖的组合物，其特征在于，它含有安全有效量的权利要求1所述的多肽或含有权利要求5-8任一所述的宿主细胞的培养物以及食品学或工业上可接受的载体。

13.一种水解β-1,4-木糖苷键的方法，其特征在于，所述方法包括将权利要求1所述的多肽或权利要求12所述的组合物与木聚糖或含有木聚糖的物质混合，从而水解β-1,4-木糖苷键，降解木聚糖。

14.如权利要求11所述的用途或权利要求13所述的方法，其特征在于，所述的含有木聚糖的物质包括：纸浆、饲料、食品或秸秆。

15.如权利要求13-14任一所述的方法，其特征在于，降解木聚糖的反应条件为：pH为3-7.5，优选4.5-7.5，更优选5.0-7.0；进一步更优选5.5-6.5；温度为35-65℃，优选为40-60℃，更优选为50-60℃。

16.权利要求1所述多肽的用途，其特征在于，所述用途包括：

(1)作为食品添加物；

(2)作为造纸过程添加物；

(3)作为纺织品加工过程添加物；

(4)作为饲料添加物；或

(5)应用于将木质纤维素转化为燃料乙醇。

17.一种用于重组表达权利要求1所述的多肽的构建物，其特征在于，所述构建物从5’至3’依次包括以下操作性连接的元件：同源上臂，权利要求2-3任一所述的多核苷酸，终止子，同源下臂；

所述的同源上臂为里氏木霉cbh1基因ATG上游的启动子序列；

所述的同源下臂为里氏木霉cbh1基因TAG及TAG下游至少500bp的序列。