[发明专利]一种鉴定太子参品种的DNA生物荧光传感器

权利要求书

1.一种鉴定太子参品种的DNA生物荧光传感器，其特征在于：加入的石墨烯为Fe₃O₄磁性石墨烯溶液、检测探针有两个且含富G序列，与靶标序列一同加入的缓冲溶液含钾离子，加入氯化血红素溶液，使用磁铁分离磁性石墨烯与DNAzyme溶液；所述的检测探针序列为a：5’GGGTTGGGCAGGTTTCGACAATGATCCTTCCGCAG 3’；b：5’ CGCTGGTCGTTCTGCTGGGCTGGGTAGGG 3’。

2.根据权利要求1所述的一种鉴定太子参品种的DNA生物荧光传感器，其特征在于：所述的检测探针为按照2：2裂分模式，探针设计为两个，两个探针均含两部分：一部分为两个GGG重复序列，另一部分为靶标互补序列，与待测柘参1号ITS序列互补。

3.根据权利要求1所述的一种鉴定太子参品种的DNA生物荧光传感器，其特征在于：所述的含钾离子缓冲溶液为50 mM Tris，包含150 mM NH₄Ac、20 mM KCl，pH 7.5。

4.一种如权利要求1所述的一种鉴定太子参品种的DNA生物荧光传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）含富G序列探针的设计

太子参品种选择柘参1号，确定柘参1号特定的ITS序列为靶标DNA，其序列为5’ CTGCGGAAGGATCATTGTCGAAACCTGCCCAGCAGAACGACCAGCG 3’；

根据ITS序列和PS2.M的序列，按照2：2裂分模式，设计了两个探针a、b；PS2.M的序列为5’ GTGGGTAGGGCGGGTTGG 3’；

（2）DNA配制

将DNA样品管8000转/分离心5 min，加入所标注的体积两倍微升数的pH 7.0、25 mM Tris-HCl缓冲溶液，充分溶解，根据需要将各DNA母液稀释成5 × 10^-6 mol/L，4 ℃冰箱中保存；所述的DNA包括探针a、b，靶标DNA；

（3）Fe₃O₄磁性石墨烯溶液配制

称取1 mg合成的Fe₃O₄磁性石墨烯，加入1 ml电阻率为10¹⁸ Ω的超纯水，充分混匀，150 W超声4 h，期间每隔20 min摇匀1次，直至磁性石墨烯充分溶解分散于溶液中，磁性石墨烯最终浓度为1 000 mg/L， 4 ℃冰箱中保存；

（4）生物传感器组装过程

取洁净的500 μL eppendorf管，按顺序加入4 μL 1 000 mg/L Fe₃O₄磁性石墨烯和10^-8 mol/L检测探针，混合均匀，共同培育60 min；再分别加入0，10^-14，10^-13，10^-12，10^-11，10^-10，5 × 10^-10，10^-9，3 × 10^-9，5 × 10^-9，3 × 10^-8，5 × 10^-8，10^-7 mol/L靶标DNA和100 μL含钾离子缓冲溶液，溶液混合均匀，培育60 min；随后加入5 × 10^-8 mol/L 氯化血红素溶液和上述含钾离子缓冲溶液将体系体积补足至250 μL，混合均匀；培育60 min后，将体系置于磁铁下作用60 min，吸取200 μL上清液于另一个eppendorf管中，分离石墨烯和DNAzyme溶液，在DNAzyme溶液体系中加入5 × 10^-7 mol/L H₂DCFDA和2 × 10^-4 mol/L H₂O₂溶液，20 min后测定荧光信号。

5.一种如权利要求1所述的一种DNA生物荧光传感器在鉴定太子参品种上的应用。