[发明专利]一种检测鲱鱼种类的方法及其检测试剂盒和引物有效
申请号: | 201410230967.9 | 申请日: | 2014-05-28 |
公开(公告)号: | CN103966346A | 公开(公告)日: | 2014-08-06 |
发明(设计)人: | 江文涛;黄臻辉 | 申请(专利权)人: | 上海第一生化药业有限公司 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12N15/11 |
代理公司: | 上海弼兴律师事务所 31283 | 代理人: | 朱水平;沈利 |
地址: | 200240 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 检测 鲱鱼 种类 方法 及其 试剂盒 引物 | ||
1.一种检测鲱鱼种类的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
(1)提取待检测样本的基因组DNA,以其为模板,以特异性扩增引物对扩增待检测样本的基因组DNA,所述特异性扩增引物对的序列分别如序列表中SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2,或SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4,或SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6,或SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8,或SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10,或SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示,
(2)将步骤(1)所得PCR扩增产物进行凝胶电泳分析,有特异性条带的待测样本为太平洋鲱鱼(Clupea pallasii)或大西洋鲱鱼(Clupea harengus)。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法还包括步骤(3),将步骤(1)所得PCR扩增产物进行测序,将测序结果与鲱鱼属的COI基因进行序列比对,若样本序列与太平洋鲱鱼(Clupea pallasii)或大西洋鲱鱼(Clupea harengus)的COI基因匹配度≥99%,则确定待测样本为太平洋鲱鱼(Clupea pallasii)或大西洋鲱鱼(Clupea harengus)。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,所述PCR反应中,PCR的反应体系为:1×PCR反应缓冲液,10~15mmol/L Mg2+,0.2~0.3mmol/L dNTP,0.1~0.3μM特异性扩增引物对,Taq酶0.01~0.1U/μL,DNA模板10~100ng/μL。
4.一种检测鲱鱼种类的试剂盒,其特征在于,其包括特异性扩增引物对,所述特异性扩增引物对的序列分别如序列表中SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2,或SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4,或SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6,或SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8,或SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10,或SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示。
5.一种检测鲱鱼种类的引物,其特征在于,其序列如SEQ ID NO:1所示或者如SEQ ID NO:2所示。
6.一种检测鲱鱼种类的引物,其特征在于,其序列如SEQ ID NO:3所示或者如SEQ ID NO:4所示。
7.一种检测鲱鱼种类的引物,其特征在于,其序列如SEQ ID NO:5所示或者如SEQ ID NO:6所示。
8.一种检测鲱鱼种类的引物,其特征在于,其序列如SEQ ID NO:7所示或者如SEQ ID NO:8所示。
9.一种检测鲱鱼种类的引物,其特征在于,其序列如SEQ ID NO:9所示或者如SEQ ID NO:10所示。
10.一种检测鲱鱼种类的引物,其特征在于,其序列如SEQ ID NO:11所示或者如SEQ ID NO:12所示。
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