[发明专利]从血液中提取核糖核酸的方法

权利要求书

1.一种从血液中提取核糖核酸的方法，其特征在于，其包括以下步骤：

a.向全血样品中加入含有阳离子表面活性剂的快速细胞裂解液，混匀，并将该混合物在室温条件下静置；

b.将步骤a中混合物进行离心分离，去除离心分离后的上层溶液，保留沉淀物；

c.清洗该沉淀物一次或多次；

d.在上述沉淀物中加入核糖核酸纯化液，混匀，并将所得混合物在室温条件下静置；

e.将步骤d中混合物进行离心分离，取出离心分离后的溶液部分，得到核糖核酸溶液。

2.根据权利要求1所述的从血液中提取核糖核酸的方法，其特征在于：该阳离子表面活性剂在裂解液总量的重量体积百分比为0.2-1％，其选自下式(I)化合物中的一种或多种：

其中，R₁选自C_10-16的烷基，R₂选自Cl^﹣、Br^﹣、HSO₄^﹣、HSO₃^﹣和COOH^﹣。

3.根据权利要求2所述的从血液中提取核糖核酸的方法，其特征在于：该阳离子表面活性剂选自十二烷基三甲基氯化铵、十二烷基三甲基溴化铵、十四烷基三甲基氯化铵、十四烷基三甲基溴化铵、十六烷基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基溴化铵中的一种或多种。

4.根据权利要求2所述的从血液中提取核糖核酸的方法，其特征在于：该快速细胞裂解液还含有去垢剂，该去垢剂在裂解液总量的重量体积百分比为0.1-10％。

5.根据权利要求4所述的从血液中提取核糖核酸的方法，其特征在于：该去垢剂选自Tween-20和TritonX-100中的一种或多种。

6.根据权利要求4所述的从血液中提取核糖核酸的方法，其特征在于：该快速细胞裂解液还含有缓冲液，该缓冲液在裂解液总量的重量体积百分比为0.5-3％且其pH值为3.8-4.2。

7.根据权利要求6所述的从血液中提取核糖核酸的方法，其特征在于：该缓冲液含有柠檬酸盐。

8.根据权利要求1至7任一项所述的从血液中提取核糖核酸的方法，其特征在于：该快速细胞裂解液的体积是全血样品的3-5倍。

9.根据权利要求1至7任一项所述的从血液中提取核糖核酸的方法，其特征在于：步骤c中清洗该沉淀物包括向该沉淀物中加入不含核酸酶的水，该不含核酸酶的水的体积是全血样品的4-6倍，混匀并离心分离，去除离心分离后的上层溶液，保留沉淀物。

10.根据权利要求9所述的从血液中提取核糖核酸的方法，其特征在于：步骤c包括清洗该沉淀物一次或多次，直至该沉淀物不显明显的红色。

11.根据权利要求1所述的从血液中提取核糖核酸的方法，其特征在于：该核糖核酸纯化液为高离子浓度，其体积是全血样品的0.5-1.5倍。

12.根据权利要求11所述的从血液中提取核糖核酸的方法，其特征在于：该核糖核酸纯化液含有缓冲液或/和氯化钠溶液，该缓冲液在纯化液总量的重量体积百分比为0.5-3％且其pH值为5.5-6.8，该氯化钠溶液在纯化液总量的重量体积百分比为5.5-10％。

13.根据权利要求12所述的从血液中提取核糖核酸的方法，其特征在于：该缓冲液含有柠檬酸盐。

14.根据权利要求13所述的从血液中提取核糖核酸的方法，其特征在于：该柠檬酸盐为柠檬酸钠。

15.根据权利要求1或11所述的从血液中提取核糖核酸的方法，其特征在于：该核糖核酸纯化液含有氯化钠溶液和核糖核酸稳定剂，该氯化钠溶液在纯化液总量的重量体积百分比为5.5-10％，该稳定剂在纯化液总量的重量体积百分比为0.1-3％。

16.根据权利要求15所述的从血液中提取核糖核酸的方法，其特征在于：该稳定剂为RNasin。

17.根据权利要求9所述的从血液中提取核糖核酸的方法，其特征在于：步骤b、步骤c和/或步骤e中离心分离的离心力为5000-10000g，离心时间为5-10分钟，步骤a中静置时间为15-30分钟，步骤d中静置时间为5-10分钟。