[发明专利]一种贻贝蒸煮液活性肽及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种贻贝蒸煮液活性肽，其特征在于该活性肽的氨基酸序列为Pro-Arg-Ser-Arg-Phe（SEQ No：1），分子量为m/z 661.75 Da。

2.一种权利要求1所述的贻贝蒸煮液活性肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）取适量贻贝蒸煮液加入到反渗透膜（RO膜）系统中，于压力2.0~3.0 MPa、温度20~30 ℃、流速0.5~1.0 m/s处理，得贻贝浓缩蒸煮液，贻贝浓缩蒸煮液喷雾干燥得蒸煮液固体粉末；

2）将制备的贻贝蒸煮液固体粉末按照1g:10~15 mL加入到甘氨酸–NaON缓冲液中，调pH至9.0~10.0，于45~55 ℃保温10~15 min，按照贻贝蒸煮液固体粉末质量的0.5~1.0 %加入蛋白酶，酶解3~5 h；

3）将酶解液加热到90~95℃灭酶活10~15 min，4500~6000 r/min离心25~30 min，取上清液；上清液依次经超滤和层析，得活性肽。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述步骤1）中的贻贝为紫贻贝、厚壳贻贝，或者翡翠贻贝。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述步骤1）中的反渗透膜为三醋酸纤维复合膜。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述步骤2）中的蛋白酶为碱性蛋白酶，酶活力≥1.9×10⁵ U/g。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述步骤3）的超滤和层析的具体过程为：

超滤：将上清液调至pH 6.5~7.0，采用1 kDa的超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于1 kDa组分，即超滤酶解液；

层析：将上述超滤酶解液用超纯水配成20~25 mg/mL的溶液，经凝胶柱层析分离，用双蒸水进行洗脱，根据280 nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，其中，羟基自由基清除活性最高组分为凝胶层析酶解物，将上述凝胶层析酶解物用超纯水配成30~50 μg/mL的溶液，利用反相高效液相色谱（RP-HPLC）进行纯化，根据羟基自由基清除活性得1个高活性抗氧化肽Pro-Arg-Ser-Arg-Phe（SEQ No：1）。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述凝胶为葡聚糖凝胶LH-20；所述反相高效液相色谱条件为：进样量20~25 μL；色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C18（250×4.6mm，5 μm）；柱温为20~25 ℃；流动相：20%乙腈（含0.1%三氟乙酸）；洗脱速度1.0 mL/min；紫外检测波长280 nm。

8.一种权利要求1所述的贻贝蒸煮液活性肽的应用，其特征在于Pro-Arg-Ser-Arg-Phe（SEQ No：1）对羟基自由基和超氧阴离子自由基具有良好的清除作用；Pro-Arg-Ser-Arg-Phe（SEQ No：1）具有抗氧化活性强和安全无毒副作用的优点，可用作抗氧化相关的保健食品和药品。