[发明专利]一种多花黑麦草抗草甘膦植株筛选方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种多花黑麦草抗草甘膦植株筛选方法。

背景技术

多花黑麦草是一年生或越年生植物，须根密集细弱，秆多数，直立高50～70厘米。穗状花序扁平。多花黑麦草适口性好，各种家畜均喜采食。多花黑麦草适于刈割青饲，调制优质干草，亦可放牧利用，也是养鱼的好饵料，我国南方各省区多利用鱼塘边旁种植，用以饲喂草鱼。多花黑麦草品质优良，含有丰富的蛋白质，叶丛期由于茎秆少而叶量多，质量更佳。多花黑麦草是重要的一年生或短期多年生禾本科牧草，适于作为大田轮作中的冬春作物。

多花黑麦草具有生长迅速、分蘖能力强、产量高、耐瘠薄等优良特性，是中国南方草地农业生产中广泛使用的草种。但是，由于田间杂草与多花黑麦草之间进行着强烈竞争，严重影响了多花黑麦草的产量及品质。为了除去田间杂草，同时采用喷洒农药的方式，目前，所使用的农药一般为草甘膦，但是草甘膦对于多花黑麦草会产生药害作用，严重的会将多花黑麦草也杀死，因此，为了避免草甘膦在杀死杂草的同时不杀死多花黑麦草，就需要使多花黑麦草具有草甘膦抗性，需选育具有草甘膦抗性的多花黑麦草，以提高多花黑麦草的竞争力。

目前，选育具有草甘膦抗性的多花黑麦草通常采用以下两种方式，第一种方式是采用连续多次喷洒草甘膦，连年选择抗性植物，最终得到抗性品系。此方法耗时较长，如黑麦草经66个世代才选择成功；第二种方式是利用抗性亲本与普通品种进行杂交及多次回交，在喷洒草甘膦的条件下选择抗性植株，利用这种方式创制抗草甘膦作物品种，则必须拥有抗源，即抗性亲本，抗性亲本的获得较为困难，其次，这种方式也需要多次回交，耗时还是较长。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种耗时较短的多花黑麦草抗草甘膦植株筛选方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案为：该多花黑麦草抗草甘膦植株筛选方法，包括以下步骤：

A、采用多花黑麦草成熟种子作为外植体，将多花黑麦草成熟种子清洗灭菌后接种到愈伤组织诱导培养基中培养18～22d得到愈伤组织，所述愈伤组织诱导培养基由MS培养基、1～5mg/L的2,4-D和0.5～3mg/L的6-BA组成；

B、将愈伤组织转入第一愈伤组织继代培养基中培养18～22d，所述第一愈伤组织继代培养基由MS培养基、1～3mg/L的2,4-D和0～0.3mg/L的6-BA组成；

C、将经过步骤B处理的愈伤组织转接到第二愈伤组织继代培养基中培养18～22d，所述第二愈伤组织继代培养基由MS培养基、1～3mg/L的2,4-D、0～0.3mg/L的6-BA、100～500mg/L的草甘膦组成；

D、将经过步骤C处理后存活的愈伤组织转接到愈伤组织分化培养基中培养18～22d，所述愈伤组织分化培养基由MS培养基、0.5～2mg/L的6-BA组成；

E、当幼苗长至2～3cm时，将存活的幼苗接入生根培养基中培养20～30d，所述生根培养基由1/2MS培养基组成；

F、当幼苗根系长出后，将其移栽。

进一步的是，在步骤A中，对多花黑麦草成熟种子清洗灭菌的处理方式如下所述：首先，将多花黑麦草成熟种子放入瓶中，并在瓶中添加水和洗涤剂浸泡12小时，所述水与洗涤剂的比例为1:3，接着再用清水冲走漂浮在液面上的不实种子，然后转移至超净工作台，先将挑选出的种子浸泡在75％的乙醇溶液中1～2min，再转到浓度为0.1％的HgCl₂溶液中消毒8min，消毒后用无菌水冲洗几次并用双层无菌滤纸吸干。