[发明专利]一种多花黑麦草组织培养再生体系的建立方法

权利要求书

1.一种多花黑麦草组织培养再生体系的建立方法，其特征在于包括以下步骤：

A、采用多花黑麦草成熟种子作为外植体，将多花黑麦草成熟种子清洗灭菌后接种到愈伤组织诱导培养基中培养18～22d得到愈伤组织，所述愈伤组织诱导培养基由MS培养基、1～5mg/L的2,4-D和0.5～3mg/L的6-BA组成；

B、将愈伤组织转入愈伤组织继代培养基中培养18～22d，所述愈伤组织继代培养基由MS培养基、1～3mg/L的2,4-D和0～0.3mg/L的6-BA组成；

C、将经过步骤B处理的愈伤组织转接到愈伤组织分化培养基中培养18～22d，所述愈伤组织分化培养基由MS培养基、0.5～2mg/L的6-BA组成；

D、当幼苗长至2～3cm时，将幼苗接入生根培养基中培养20～30d，所述生根培养基由1/2MS培养基组成；

E、当幼苗根系长出后，将其移栽。

2.如权利要求1所述的多花黑麦草组织培养再生体系的建立方法，其特征在于：在步骤A中，对多花黑麦草成熟种子清洗灭菌的处理方式如下所述：首先，将多花黑麦草成熟种子放入瓶中，并在瓶中添加水和洗涤剂浸泡12小时，所述水与洗涤剂的比例为1:3，接着再用清水冲走漂浮在液面上的不实种子，然后转移至超净工作台，先将挑选出的种子浸泡在75％的乙醇溶液中1～2min，再转到浓度为0.1％的HgCl₂溶液中消毒8min，消毒后用无菌水冲洗几次并用双层无菌滤纸吸干。

3.如权利要求1所述的多花黑麦草组织培养再生体系的建立方法，其特征在于：所述愈伤组织诱导培养基、愈伤组织继代培养基、愈伤组织分化培养基中含有的MS培养基包括KNO₃、NH₄NO₃、MgSO4·7H₂O、KH₂PO₄、CaCl₂·2H₂O、MnSO₄·4H₂O、ZnSO₄·7H₂O、H₃BO₃、KI、NaMoO₄·2H₂O、CuSO₄·5H₂O、CoCl₂·6H₂O、Na₂-EDTA、FeSO₄·4H₂O、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、肌醇、蔗糖、琼脂，各组分的含量如下所述：KNO₃为1900mg/L，NH₄NO₃为1650mg/L，MgSO4·7H₂O为370mg/L，KH₂PO₄为170mg/L，CaCl₂·2H₂O为440mg/L，MnSO₄·4H₂O为22.3mg/L，ZnSO₄·7H₂O为8.6mg/L，H₃BO₃为6.2mg/L，KI为0.83mg/L，NaMoO₄·2H₂O为0.25mg/L，CuSO₄·5H₂O为0.025mg/L，CoCl₂·6H₂O为0.025mg/L，Na₂-EDTA为37.3mg/L，FeSO₄·4H₂O为27.8mg/L，甘氨酸为2.0mg/L，盐酸硫胺素为0.1mg/L，盐酸吡哆醇为0.5mg/L，烟酸为0.5mg/L，肌醇为100mg/L，蔗糖30g/L、琼脂8g/L，pH值为6.0。

4.如权利要求3所述的多花黑麦草组织培养再生体系的建立方法，其特征在于：在步骤A中，所述愈伤组织诱导培养基中含有的2,4-D为2mg/L，含有的6-BA为1mg/L。

5.如权利要求4所述的多花黑麦草组织培养再生体系的建立方法，其特征在于：在步骤B中，所述愈伤组织继代培养基中含有的2,4-D为2mg/L，含有的6-BA为0.2mg/L。