[发明专利]一种单细胞转移方法和转移系统

说明书

技术领域

本发明生物检测领域，尤其涉及一种单细胞转移方法和转移系统。

背景技术

单细胞水平分析是细胞生物学、神经生物学和胚胎植入前遗传学诊断中不可缺少的一项，需要通过对单细胞进行操作，来实现单细胞水平的基因检测、神经电生理检测、免疫学检测、蛋白检测等。其中单细胞转移操作是实现各类检测首要的一步。

目前单细胞转移的方法主要有：①以显微操作系统作为转移装置的单细胞转移方法和②以口吸式吸管作为转移装置的单细胞转移方法。此类方法存在诸多不足，如：显微操作系统作为转移装置的过于依赖仪器，操作过程繁琐，细胞转移效率低下；口吸式吸管作为转移装置的不能精确控制转移液体体积，常常携带的液体过多而影响检测结果；此外，这些方法特别不适用于单细胞基因检测，包括单细胞基因组检测、单细胞转录组检测、单细胞基因突变检测、单细胞染色质(体)检测等，所以难以推广应用。

发明内容

本发明的目的是针对现有的单细胞转移装置操作过程复杂，细胞转移效率低，不能精确控制转移液体体积的不足，提供一种单细胞转移方法和转移系统，从而能够准确地转移单细胞，并且能够方便、快捷地转移单细胞，转移的单细胞转移效率、存活率高。

针对上述目的，本发明提供的技术方案如下：

一方面，本发明提供一种单细胞转移方法，所述方法包括以下步骤：

1)高温烘烤吸管，然后将所述吸管的一段封闭为封闭端，另一端作为吸入端，用于转移单细胞的吸管，所述吸入端的直径适合所述单细胞；

2)将所述吸管的吸入端置于粘稠的矿物油中，所述矿物油在毛细管力作用下进入吸管内，再将所述吸管取出，挤压所述吸管的封闭端，挤出微量矿物油，得到载有矿物油的吸管；

3)然后于倒置显微镜或体视镜下，将所述载有矿物油的吸管的吸入端的端口对准溶液的单细胞，将所述单细胞吸入吸管，得到载有单细胞的吸管，并通过所述倒置显微镜或体视镜控制进入所述吸管中溶液的体积；

4)再将所述载有单细胞的吸管转移至目的位置后，加压引导吸管形变，将所述单细胞从吸管中排出，即得。

优选地，所述吸管中溶液的体积为3～15nl(纳升)，在该体积下转移细胞时携带能够尽可能少液体成分，以避免携带液体成分对后续细胞操作带来的负面影响。

优选地，在步骤1)中，所述吸管为玻璃管或巴氏德吸管。

更优选地，当所述吸管为玻璃管时，所述吸入端通过高温烘烤后拉伸至适合所述单细胞的直径。

优选地，在步骤1)中，用酒精灯或电阻仪高温烘烤吸管。

优选地，所述单细胞为动植物细胞或动物卵子、极早期动物胚胎。

另一方面，本发明还提供一种单细胞转移系统，所述系统包括用于转移单细胞的吸管和倒置显微镜或体视镜，所述吸管中载有矿物油，所述吸管包括封闭端和吸入端，所述吸入端的直径适合所述单细胞；所述倒置显微镜或体视镜用于控制进入所述吸管中液体的体积。

优选地，所述吸管中溶液的体积为3～15nl(纳升)。

优选地，所述吸管通过酒精灯或电阻仪高温烘烤。

优选地，所述单细胞为动植物细胞或动物卵子、极早期动物胚胎。

本发明的单细胞转移方法和系统结合了矿物油的粘稠性能、半封闭玻璃管，能够在挤压下发生形变，来实现单细胞转移的方便快捷准确、携带液体微量的目的，并通过在倒置显微镜或体视镜更准确控制进入玻璃管中液体的体积，便于进一步单细胞水平的基因检测、细胞功能检测等操作，转移的单细胞转移效率、存活率高。对于动物卵子与早期胚胎转移，每分钟可转移30-100个，对于动植物细胞或卵裂球每分钟可转移20-60个，转移的细胞、卵子、胚胎、卵裂球的存活率接近100％，能够得到广泛地推广应用。

附图说明

图1为本发明所述的用于转移单细胞的吸管的结构示意图，其中，A为吸入端为直通型的吸管的结构示意图；B为吸入端为弯折型的吸管的结构示意图；C为吸入端为直通型，中间为球形的吸管的结构示意图；D为吸入端为弯折型，中间为球形的吸管的结构示意图；

图中，1为吸入端，2为封闭端。

具体实施方式

以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

除非特别指明，以下实施例中所用的试剂均可从正规渠道商购获得。

除非特别指明，以下实施例中所用的小鼠为ICR品系小鼠，购自同济大学动物中心；小鼠骨髓间充质干细胞购自同济大学干细胞中心；小麦细胞由试验田种植，品系为“中13”。