[发明专利]用于检测马传染性贫血病毒p26蛋白的试剂盒及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种病毒抗原检测试剂盒及其用途，特别涉及一种用于检测马传染性贫血病毒p26蛋白的试剂盒及其用途，本发明属于病毒感染的诊断及检测技术领域。

背景技术

马传染性贫血病毒(EIAV)是反录病毒科(Retroviridae)慢病毒属的成员，可引起马、骡、驴的传染性贫血病，以发热、贫血、出血、黄疸、浮肿、心机能紊乱、血相变化和进行性消瘦为特征。根据临诊表现，常分为急性、亚急性、慢性和隐性4种病型,除有主要症状如发烧、贫血、黄疸、出血、心机能紊乱外，血液学的变化也很突出，如红细胞数减少、血红蛋白量降低、白细胞数常减少和静脉血中出现吞铁细胞等。该病呈世界分布，给养马业造成巨大经济损失。此外也曾有几例人感染此病毒的报道。发烧期的病马是最危险的传染源，其血液和脏器(肝、脾、骨髓、淋巴结等)含有大量病毒，常随同分泌物和排泄物排出体外而散播。慢性病马能长期甚至终身带毒。

EIAV是正链RNA病毒，其基因组结构与其它慢病毒相似。病毒RNA编码三个主要结构基因gag、pol和env，此外还有几个小开放阅读框架(ORF S1、S2、S3)，其中gag和pol基因部分重叠。病毒RNA基因组两端是完全相同的重复区(R区)，在5’R下游是5’独特区(US)；3’端R区上游是3’独特区(U3)。EIAvGag前体蛋白为分子量为55KD的Pr55，Pr55经病毒编码的蛋白酶裂解产生四种主要的结构蛋白。分别为基质蛋白MP15、衣壳蛋白CA/p26、核衣壳蛋白NC/P11及核心蛋白p9。基质蛋白MA、衣壳蛋白CA、核衣壳蛋白NC是构成病毒粒子的主要蛋白，尤其是p26，可以占病毒蛋白总量的40％，在病毒装配和出芽过程中发挥重要作用。由于P26蛋白非常保守，任何不同血清型的马传贫病毒感染马都能产生对P26抗原的抗体，因此P26蛋白是马传贫免疫琼脂扩散(AGID)和ELISA诊断法使用的主要抗原。

马传贫的流行病毒调查主要以血清学检测为主，然而血清抗体的产生往往滞后于病毒感染，因此，血清学检测抗体会有漏检的情况出现。目前，针对EIAV抗原检测的方法主要有RT-PCR方法、ELISA方法以及传统的病毒分离鉴定等，病毒分离耗时费力，荧光定量RT-PCR使用Taq探针法价格昂贵，相比之下，ELISA方法最为简便快捷、成本低又敏感性高、特异性好。然而利用ELISA方法检测EIAV病毒的报道并不多见，国际上也没有检测马传贫病毒的商品化试剂盒。目前多采用商品化的反转录酶试剂盒检测和定量EIAV病毒，但是该试剂盒中应用HIV的反转录酶作为标准品，因此在定量和检测EIAV时的准确性并不十分理想，而且该试剂盒价格昂贵，不适合于大批量临床样品的检测。因此，建立一种快速、敏感、可靠的方法检测EIAV病毒，形成可应用于实际临床样本检测的ELISA商品化试剂盒是十分必要和亟待解决的。

该检测方法的应用对及时控制疾病传播和蔓延，最大限度的减少马传贫对养马业造成的损失具有重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种用于检测马传染性贫血病毒p26蛋白的试剂盒及其用途。

为此，本发明发明人制备并筛选出了两株能够识别马传染性贫血病毒p26蛋白不同抗原表位的杂交瘤细胞株，特异性实验证明由该两株杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体只与马传染性贫血病毒而不与I型马疱疹病毒，IV型马疱疹病毒，马流感病毒以及马动脉炎病毒反应，说明本发明的方法特异性好。此外，灵敏度实验证明使用本发明的方法检测马传染性贫血病毒p26蛋白抗原，其敏感性为98pg。因此，本发明为马传染性贫血病毒的检测提供了一种有效的，准确性高的新的检测手段。

具体的，本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：

本发明的一种用于检测马传染性贫血病毒p26蛋白的试剂盒，其特征在于所述试剂盒包含由保藏号CGMCC NO.9106以及保藏号为CGMCC NO.9107的杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体，任选其中一种单克隆抗体是用辣根过氧化物酶或异硫氰酸荧光素或生物素标记的。

其中，保藏号为CGMCC NO.9106的杂交瘤细胞株，命名为EIAV-p26-1G11，分类命名为单克隆抗体杂交瘤细胞株，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址在北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所，保藏日期为2014年4月21日。