[发明专利]一种基因突变和酶活性的检测方法

权利要求书

1.一种基因突变的检测方法，其特征在于：步骤如下：

（1）制备纳米金颗粒；

（2）制备纳米金标记的双链DNA：将得到的纳米金颗粒通过S-Au键自组装与巯基标记的DNA探针相连接，制得纳米金探针；之后将标记了纳米金颗粒的探针与靶DNA序列杂交，形成不对称dsDNA，在Taq DNA聚合酶作用下，使探针以靶序列为模板延伸为平末端双链DNA；

（3）将FAM羧基荧光素标记的探针与相应的模板温育杂交形成FAM标记的双链DNA，将其与（2）中的平末端dsDNA用T4连接酶在室温下连接，冷冻离心，沉淀经洗涤、分离，检测并判断得到的FAM标记的连接产物：

a、当步骤（2）所述的靶序列为与巯基探针互补的基因片段时，步骤（3）得到的沉淀中有可检测的荧光信号；

b、当步骤（2）所述的靶序列为发生了单碱基突变的基因片段时，步骤（3）得到的沉淀中中无可检测的荧光信号；

c、当步骤（2）所述的靶序列为任意序列时，步骤（3）得到的沉淀中无可检测的荧光信号。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）制备得到的纳米金颗粒的直径为 56-70nm。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）中所述的离心条件为12000 r/min，4℃，15 min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：当所述靶DNA为p53基因序列时，所述巯基标记的DNA探针的核苷酸序列为：HS- (CH₂)₆- CTA GAG GCA TCG TAG。

5.一种酶失活的检测方法，其特征在于：步骤如下：

（1）制备纳米金颗粒；

（2）制备纳米金标记的双链DNA：将得到的纳米金颗粒通过S-Au键自组装与巯基标记DNA探针相连接，制得纳米金探针；之后将标记了纳米金颗粒的探针与与其完全互补的靶DNA序列杂交，形成不对称dsDNA，在Taq DNA聚合酶作用下，使探针以靶序列为模板延伸为平末端双链DNA；

（3）将FAM羧基荧光素标记的探针与相应的模板温育杂交形成FAM标记的双链DNA，将其与（2）中的平末端dsDNA用T4连接酶在室温下连接，冷冻离心，沉淀经洗涤、分离，检测并判断得到的FAM标记的连接产物：

a、当步骤（2）所述Taq DNA聚合酶失活时，步骤（3）得到的沉淀中无可检测的荧光信号；

b、当步骤（3）所述T4 DNA连接酶失活时，步骤（3）得到的沉淀中无可检测的荧光信号；

c、当步骤（2）所述Taq DNA聚合酶失活且步骤（3）所述T4 DNA连接酶失活时，步骤（3）得到的沉淀中无可检测的荧光信号。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤（3）中所述的离心条件为12000 r/min，4℃，15 min。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：当所述靶DNA为p53基因序列时，所述巯基标记的DNA探针的核苷酸序列为：HS- (CH₂)₆- CTA GAG GCA TCG TAG。