[发明专利]用于同时检测海洋中四种致病菌的多重PCR引物及其设计方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物检测领域，具体涉及一种用于同时检测海洋阴沟肠杆菌、产单核细胞增生李斯特菌、嗜水气单胞菌和副溶血弧菌的多重PCR引物及其设计方法。

背景技术

阴沟肠杆菌、产单核细胞增生李斯特菌、嗜水气单胞菌和副溶血弧菌，属于可以通过食物、水进行传播的病原菌。它们的生物学特性和致病性有一定的区别，但都可以引起食物中毒和消化系统疾病。

阴沟肠杆菌属于条件致病菌，一般条件下不会引起致病，但也可引起败血症、下呼吸道感染、伤口感染、软组织感染、心内膜炎、泌尿道感染等症状。阴沟肠杆菌能够引起人类重视，主要是因为其可产生超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶，耐药情况严重，并且具备多种其他耐药机制，给临床抗生素治疗带来新的挑战。阴沟肠杆菌耐药机制主要包括产生β-内酰胺酶、qnr基因介导耐药、整合子、主动外排泵系统作用、药物作用靶位的改变、外膜通透性改变等。这些复杂的耐药机制存在，对于其他细菌混合性感染的抗生素治疗造成无效或疗效甚微。阴沟肠杆菌广泛存在于自然界中，由其引起的海产品食物中毒偶有发生，但是在医院中的传播仅次于大肠杆菌和克雷伯菌。

产单核细胞增生李斯特菌是一种重要人畜共患病的病原菌。人感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多等。该菌广泛存在于自然界中，食品中存在的产单核细胞增生李斯特菌对人类的安全具有危险，在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一。在欧美、日本由该菌造成的临床疾病和食物污染问题，已超过在细菌性食物中毒中占第1位的沙门氏菌。我国多地也有该菌引发疾病而住院和死亡的报道。因为该菌是一种细胞内寄生菌，抗生素治疗只能在一段时间内发挥作用，目前发现其耐药性呈现散状分布，对一些抗生素耐药性不断增强。

嗜水气单胞菌广泛分布于自然界的各种水体中，是多种水生动物的原发性致病菌，对人而言为条件致病菌，是典型的人-兽-鱼共患病的病原菌。嗜水气单胞菌可以产生毒性很强的外毒素，如：溶血素、组织毒素、坏死毒素、肠毒素和蛋白酶等，主要引起肠道性感染。嗜水气单胞菌感染人的病例少有记载，但是一旦发作，死亡率很高，治愈率较低，常会与其它菌(如温和产气单胞菌、弧菌等)混合感染使病情加重。在我国也发生过多次由嗜水气单胞菌引起的食物中毒。

副溶血弧菌对人和动物均有较强的毒力，其致病物质主要有耐热性溶血素(TDH)和耐热溶血相关毒素(TRH)，这些毒素具有溶血活性、肠毒性和致死作用。该菌因在含食盐较浓(3％-4％以上)的培养基中生长，而在不含盐的培养基内不能繁殖，故而又称嗜盐菌。副溶血弧菌在世界各地均有分布，通常存在于海岸线区域以及海产品中，人多因食用污染本菌又未经良好加工的海产品，如蟹类、牡蛎、虾等而引起食物中毒。副溶血弧菌引起的食物中毒，在沿海地区细菌性食物中毒中所占比例较高，是沿海区域最主要的食物中毒细菌之一。其引起的细菌性食物中毒危害仅次于沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌和肉毒梭菌。我国沿海地区每年都有大量由副溶血性弧菌引起食物中毒报道。