[发明专利]一种兼抗根结线虫病和黄化曲叶病毒病番茄育种材料的选育方法

说明书

技术领域

本发明属于番茄育种方法领域，尤其是一种抗病毒能力强、提高产量的兼抗根结线虫病和黄化曲叶病毒病番茄育种材料选育方法。 

背景技术

由番茄根结线虫(Meloidogyne spp.)引起的番茄根结线虫病是严重影响设施番茄生产的一种重要的土传病害，由烟粉虱(Bemisia tabaci)介导侵染番茄的番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus，TYLCV)是近年来严重影响番茄生产的重要病毒性病害之一。随着我国番茄栽培特别是设施栽培面积的不断增加以及连作年限的增长，加剧了这两种病害的同时爆发，造成番茄严重减产。 

目前，国内外在番茄抗根结线虫病育种方面取得一定成就但进展依然缓慢，难以有效地选育抗根结线虫品种。其主要原因是番茄根结线虫存在多个生理小种，尚未发现对多个生理小种均表现抗性的种质资源。 

随着分子生物学技术的发展，国内外学者相续开展了番茄抗根结线虫基因定位研究。目前在番茄中共发现了9个根结线虫抗性基因，分别为Mi-1、Mi-2……Mi-9，对这些抗性基因的研究可以加快抗病新品种的选育(tgrc.ucdavis.edu)。在这9个基因中仅有Mi-1得以克隆，同时Mi-1基因特异分子标记的开发大大提高了分子标记辅助选择的效率(Milligan S B，et al.The root knot nematode resistance gene Mi from tomato is a member of the leucine zipper，nucleotide binding，leucine-rich repeat family of plant genes[J].Plant Cell，1998，10(8)：1307-1319)。 

番茄对黄化曲叶病毒的抗性基因主要来源于野生番茄中的多毛番茄(S.habrochaites)、醋栗番茄(S.pimpinellfium)、秘鲁番茄(S. peruvianum)、智利番茄(S.chiense)和契斯曼尼番茄(S.cheesmanii)，利用这些野生材料定位到Ty-1、Ty-2、Ty-3、Ty-4和Ty-5等抗病基因(杨晓慧.番茄抗黄化曲叶病基因Ty-2的精细定位即不同抗性基因效应比较[D]，中国农业科学院，2012，博士论文)。有研究发现，只含有Ty-1、Ty-2、Ty-3、Ty-4和Ty-5任何一个抗性基因的番茄株系，均对番茄黄化曲叶病表现出一定的抗性，但抗性水平不等。其中，Ty-3基因对世界不同地区不同的番茄黄化曲叶病毒中均具有较高的抗性，除了抗TYLCV还抗ToMoV，即使在至少7种病毒复合侵染的危地马拉仍然表现出高水平的抗性(Ji Y，et al.Ty-3，a begomovirus resistance locus near the tomato yellow leaf curl virus resistance locusTy-1on chromosome6of tomato.Mol.Breed.，2007，20：271-284.)。 

近年来，尽管对番茄抗根结线虫病和黄化曲叶病毒病抗病基因研究取得了较大进展，也开发了一些与抗病基因紧密连锁的标记，但是在利用这些连锁标记辅助选择方面的应用还远远没有普及。分子标记与常规育种完美结合是实现高效育种的绝佳途径。 

培育和种植抗病品种是防治植物病害最经济有效的方法之一，选育抗根结线虫病和黄化曲叶病毒病的番茄品种在蔬菜生产中具有重要的应用价值。目前尚无高效选育兼抗根结线虫病和黄化曲叶病毒病番茄育种材料的方法。 

发明内容

本发明的目的是提供一种抗病毒能力强、提高产量的兼抗根结线虫病和黄化曲叶病毒病番茄育种材料选育方法。 

本发明的技术方案是：一种兼抗根结线虫病和黄化曲叶病毒病番茄育种材料选育方法，其特征是包括下列步骤： 

(1)以抗根结线虫病番茄纯合材料和抗黄化曲叶病毒病番茄纯合材料进行杂交，并构建F₂群体； 

(2)从所述步骤(1)F₂群体中采用分子标记方法对根结线虫病和黄化曲叶病毒病两抗病位点均表现纯合的单株进行筛选； 

(3)对步骤(2)中两个抗病位点均表现纯合的单株进行严格自交，采用单粒传方式进行选择，从F₅代开始，用均匀分布于12条染色体的120对SSR引物对所选材料遗传背景的纯合性进行鉴定，直 至绝大多数位点表现纯合为止停止自交；