[发明专利]一种利用适配体和正电AuNPs比色检测四环素的方法

说明书

技术领域

利用适配体和正电AuNPs比色检测四环素的方法，属于分析化学技术领域。

背景技术

四环素类为广谱抗菌药，是抗生素中最为便宜的一类，常用的四环素类药物有四环素、金霉素、土霉素、强力霉素等。

在四环素类药物中四环素的使用较为广泛，低廉的价格使得四环素在发展中国家大受欢迎，不仅作为药物广泛用于人类与动物疾病的治疗，同时也作为添加剂大量使用，用于预防和治疗畜禽疾病，用于提高饲料利用效率，促进动物生长。但由于该类药物的使用不合理及滥用，容易诱导产生耐药菌株，也会导致发生在食品及牛奶中四环素的残留问题。欧盟及我国均规定牛奶中四环素的最大残留限量为0.1mg/kg。

儿童长期反复使用四环素，有可能影响牙齿的发育和形成，不但使牙齿变黄，还会引起牙釉质发育不良(牙齿表面不光滑，出现小凹陷)或牙齿畸形。同时也容易患龋齿。老年患者服用过量常伴有肾功能减退等症状，严重影响人体健康，给人类健康带来重大隐患。

四环素残留的测定方法主要有微生物法、酶联免疫法(ELISA)、薄层色谱法和液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱法(LC-MS)等，尽管这些方法灵敏度高，但这些方法存在特异性差的缺点，这些方法需要昂贵的设备，测定时间较长，成本高，需要专业技术人员操作，不适合现场快速检测。因此需要建立一种快速、简单、灵敏的方法检测食品中的四环素。

发明内容

本发明的目的是提供利用适配体和正电AuNPs比色检测四环素的方法，以快速、简单、灵敏的检测食品中抗生素四环素的残留量。

技术问题：利用适配体和正电AuNPs比色检测四环素的方法基于以下原理：

新制备的正电AuNPs，即巯基乙胺修饰的AuNPs分散均匀，由于AuNPs表面氨基的作用而带正电荷，溶液呈现酒红色。

当加入适配体后，由于其含有带有负电的磷酸根，由于静电吸附作用而使AuNPs聚集，颜色由酒红色变成蓝色，吸收峰发生红移。

如果四环素与适配体先作用后形成四环素-适配体结合物后，在加入到正电AuNPs溶液中，就不会引起AuNPs聚集，溶液仍呈现酒红色。

本发明的技术方案：巯基乙胺修饰的AuNPs的制备；利用比色法观察和检测含有不同浓度的四环素的体系。

(1)巯基乙胺修饰的AuNPs的制备

首先，400μL0.213M的半胱胺盐酸盐和40mL1.40mM的HAuCl₄的混合液加入到100mL的圆底烧瓶中。该混合液在黑暗中搅拌20分钟，快速加入10μL10mM的新配置的NaBH₄溶液，继续在黑暗中搅拌30分钟。将所得到的溶液冷却至室温后用0.4μm的微孔膜去掉沉淀物，滤液放置在4℃冰箱中以备检测使用。

(2)利用比色法观察和检测含有不同浓度的四环素的体系

配制以下混合溶液：分别将40μL不同浓度的四环素标准品与20μL50nM的适配体加入到1.5mL的离心管中，涡旋震荡14min，然后加入40μL的AuNPs，将最终体积用水稀释到500μL，室温下反应12min。AuNPs的颜色和吸收峰会随着四环素溶液浓度的变化而变化；根据A₅₂₂与四环素的浓度建立标准曲线。

所用四环素标准品最终浓度依次为：0.2μg/mL，0.4μg/mL，0.6μg/mL，1μg/mL，1.2μg/mL，1.6μg/mL，2μg/mL。线性范围为0.2μg/mL-2μg/mL。

本发明的有益效果：本发明制备了巯基乙胺修饰的AuNPs，并建立了一个简单、快速、灵敏的信号法，能够快速检测四环素，为今后的监管提供了方便。

附图说明

图1不同体系的紫外吸收图：(a)AuNPs，(b)AuNPs–四环素，(c)AuNPs-四环素-适配体，(d)AuNPs-适配体AuNPs：8.3×10^-10M,四环素,2μg/mL。

图2不同浓度的四环素标准品与AuNPs作用的紫外吸收图：a-g:0.2μg/mL，0.4μg/mL，0.6μg/mL，1μg/mL，1.2μg/mL，1.6μg/mL，2μg/mL。

图3莱克多巴胺的标准曲线图：以A₅₂₂与四环素的浓度建立标准曲线。

图4不同反应时间(2min-20min，每两分钟检测一次)对AuNPs-四环素-适配体体系的影响图：四环素,2μg/mL，适配体，2nM。

具体实施方式