[发明专利]一种利用寇式隐甲藻ATCC30772发酵废弃菌渣制备高产量纳他霉素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及以纳塔尔链霉菌（Streptomyces natalensis）发酵生产纳他霉素的工艺方法，特别是一种利用隐甲藻发酵生产DHA所得发酵废弃菌渣来提高纳他霉素产量的生产方法。

技术背景

纳他霉素是一种多烯类大环内酯抗生素，主要由恰塔努加链霉菌(Streptomyces chmanovgensis)、褐黄孢链霉菌 (Streptomyces gilvosporeus)和纳塔尔链霉菌(Streptoyces natalensis)等发酵产生。它的分子的疏水部分即大环内酯的双键部分以范德华力与细胞质膜上的甾醇分子结合，形成抗生素——甾醇复合物，由此破坏了细胞质膜的渗透性，而它的的亲水部分即内酯的多醇部分则在膜上形成水孔，损伤膜的通透性，继而引起菌体细胞内氨基酸、电解质等重要物质渗出，最终导致菌体死亡。

作为一种新型的生物食品防腐剂，纳他霉素以其高效广谱的杀菌效果及无毒无害的安全保证，在全球发展迅速，其产品的应用不断拓展至食品加工、医药等多个行业。1982年6月，美国FDA（Food and Drug Administration）正式批准纳他霉素可以用作食品防腐剂；1997年，中国卫生部批准可以在我国食品中使用纳他霉素作为防腐剂。

目前，国内外提高纳他霉素发酵水平主要是通过诱变育种、调整发酵工艺、基因工程等手段，而采用添加另外一种发酵废弃菌渣来提高纳他霉素产量的报道并不多见；尤其未发现有公布使用寇式隐甲藻ATCC30772发酵废弃菌渣来提高纳他霉素产量的报道，此方法既提高了目标产物产量，降低了生产成本，缩短了发酵周期，又节约了能源，实现了废物再利用，有利于环境保护。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用寇式隐甲藻ATCC30772发酵废弃菌渣制备高产量纳他霉素的方法。

一种利用寇式隐甲藻ATCC30772发酵废弃菌渣制备高产量纳他霉素的方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1) 将隐甲藻ATCC30772发酵200-240个小时之后的发酵液离心，得菌体沉淀,用蒸馏水清洗3次,在80℃左右的烘箱中干燥，研磨成粉末；

(2) 在纳塔尔链霉菌发酵的0-72h间一次性加入寇式隐甲藻ATCC30772发酵废弃菌渣，发酵结束后得纳他霉素。

述的一种利用寇式隐甲藻ATCC30772发酵废弃菌渣制备高产量纳他霉素的方法，其特征在于:

包括以下步骤：

(1) 将隐甲藻ATCC30772发酵200-240个小时之后的发酵液离心，得菌体沉淀,用蒸馏水清洗3次,在80℃烘箱中干燥，研磨成粉末；

(2) 在纳塔尔链霉菌发酵的0-72h间一次性加入寇式隐甲藻ATCC30772发酵废弃菌渣，5-50g/L，pH 7.0-7.5，发酵结束后得纳他霉素。

一种利用寇式隐甲藻ATCC30772发酵废弃菌渣制备高产量纳他霉素的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）摇瓶种子培养

无菌条件下，将适量纳塔尔链霉菌孢子涂布于琼脂斜面培养基中，置于27-30℃培养间中培养6-10天，然后将培养好的孢子配置成孢子悬浮液，吸取1-3ml加入盛有摇瓶种子培养基的三角瓶中，27-30℃条件下摇床培养36-48h，摇床转速为180-250rmp；

所述琼脂斜面培养基为葡萄糖5-15g/L，酵母浸膏1-5g/L，麦芽浸粉1-5g/L，蛋白胨3-10g/L，琼脂粉10-20g/L，pH 7.0-7.5；

所述种子培养基为葡萄糖10-30g/L，酵母粉30-50g/L，酵母浸膏3-10g/L，pH 7.0-7.5； 

2）摇瓶发酵培养

将种子液按5%-10%的接种量接入盛有发酵培养基的三角瓶中，27-30℃条件下摇床培养36-48h，摇床转速为180-250rmp；在发酵20-30h加0.5%-1%的丙酸钠，同时在0-72h发酵时间内一次性添加寇式隐甲藻ATCC30772发酵废液弃菌渣5-50g/L，pH 7.0-7.5，发酵结束后得纳他霉素；

所述发酵培养基为葡萄糖5-15g/L，可溶性糊精30-50g/L，酵母粉20-40g/L，pH 7.0-7.5。

所述的一种利用寇式隐甲藻ATCC30772发酵废弃菌渣制备高产量纳他霉素的方法，其特征在于：