[发明专利]一种检测L-组氨酸的生物传感器的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种检测L-组氨酸的生物传感器的制备方法及其应用，包括以下步骤： 

(1)将0.1～10.0μmol巯基修饰DNA2在TCEP溶液中活化，再加入到1mL转化酶修饰胶体金(转化酶-胶体金)溶液中，轻微震荡8～24小时，然后在8000～16000转/分转速下离心30分钟，用1mL的PBS洗涤三次，再将沉淀分散于1mL的PBS中，得DNA2修饰转化酶-胶体金，置于4℃下储存； 

(2)在20～200μL链霉亲和素修饰的磁珠中加入biotin修饰的单链DNA1，37℃下反应后，并用PBS洗涤两次，去除上清液，沉淀分散于1mL PBS缓冲液中，即得DNA1-链霉亲和素修饰的磁珠(DNA1-MBs)； 

(3)取1mL的DNA1-链霉亲和素修饰的磁珠，加入1mL的DNA2修饰转化酶-胶体金，室温震荡反应，然后磁性分离，并用PBS洗涤3次，得L-组氨酸生物传感器； 

其中：所述的转化酶修饰胶体金按如下的方法制备而成：取10～200μL的转化酶加入装有1mL的胶体金的离心管内，在37℃下反应10～80分钟，在8000～16000转/分转速下离心20分钟，去除未被结合的酶，再用50μL的PBS洗涤3次，得转化酶修饰胶体金(转化酶-胶体金)； 

优选的，所述的DNA1的部分序列为：5’-GAG TGA TAT GAA GGA TGG GCG TGT CGG GGC TAT TCT CTA C-biotin-3’； 

优选的，所述的DNA2的部分序列为：5’-GTA GAG AAG GATr ATC ACT CAG C-SH-3’； 

其中所述的金纳米粒子按如下方法制备而成：先把制备与储存胶体金溶液所用的玻璃容器(容量瓶，棕色广口瓶，圆底烧瓶等)用王水泡洗30分钟，然后用二次水冲洗干净，烘干备用；在100mL圆底烧瓶中加入50mL1mmol/L的HAuCl₄，搅拌加热至沸腾，然后快速加入5mL38.8mmol/L的Na₃C₆H₅O₇，再加热10分钟，搅拌15分钟，冷却至室温后用0.8μm的尼龙膜过滤器过滤，转移到棕色瓶中于4℃下保存；用扫描电镜观察胶体金的粒径为20-25nm。 

2.一种利用权利要求1制备的生物传感器检测L-组氨酸含量的方法，其特征在于：使用不同浓度的L-组氨酸加入L-组氨酸生物传感器中反应后，通过磁性分离，取出上清液；在上清液中加入10～200μL的0.5mM蔗糖溶液，37℃下反应30～180分钟，用血糖仪检测生成葡萄糖含量，以血糖仪读数为分析信号，进行L-组氨酸的测定。 

3.根据权利要求1所述的生物传感器在检测L-组氨酸含量中的应用。 

4.根据权利要求1的检测L-组氨酸的生物传感器的制备方法及其应用，其特征在于所述磷酸缓冲液为0.1M，pH＝8.0的配制方法：称取0.1g KH₂PO₄、1.45g Na₂HPO₄·12H₂O溶解于1L水中，即得。 

5.根据权利要求1的检测L-组氨酸的生物传感器的制备方法及其应用，其特征在于所述PBS缓冲溶液为0.2M(pH＝7.4)，其配置方法为：称取0.2g KH₂PO₄、8.0g NaCl、2.9g Na₂HPO₄·12H₂O及0.2g KCl溶解于1L水中即得。