[发明专利]一种产庆大霉素C2a工程菌及其应用有效
| 申请号： | 201410247211.5 | 申请日： | 2014-06-06 |
| 公开（公告）号： | CN104004681A | 公开（公告）日： | 2014-08-27 |
| 发明（设计）人： | 洪文荣 | 申请（专利权）人： | 福州市鼓楼区荣德生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N15/74;C12P19/50;A61K35/74;A61P31/00;C12R1/31 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350002 福建省福州市鼓*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 庆大霉素 c2a 工程 及其 应用 | ||
1.一种产庆大霉素C2a工程菌，其特征在于：所述工程菌为绛红色小单孢菌GB102，该菌株已于2014年4月25日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏编号为CGMCC No. 9112。
2.根据权利要求1所述的一种产庆大霉素C2a工程菌，其特征在于，在产庆大霉素放线菌的基因组中灭活genB2基因，所述基因序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求2所述的工程菌，其特征在于，敲除基因的DNA序列为genB2的DNA序列。
4.根据权利要求2所述的工程菌，其特征在于，灭活genB2基因的方法包括基因敲除和基因置换。
5.一种如权利要求1所述的一种产庆大霉素C2a工程菌的制备方法，其特征是，主要包括以下步骤：
(1)灭活genB2同源重组质粒的构建；
(2)灭活genB2同源重组质粒转化绛红小单孢菌；
(3)灭活genB2单交换菌株的筛选；
(4)灭活genB2基因工程菌的筛选；
(5)灭活genB2基因工程菌代谢产物的鉴定。
6.根据权利要求5所述工程菌的制备方法，其特征是，基因敲除的方法为PCR扩增genB2基因上下游序列大约2000bp的两个片段作为同源交换臂，按顺序连接到穿梭质粒pKC1139中，得到同源重组质粒pZB303。
7.根据权利要求5所述的一种产庆大霉素C2a工程菌的制备方法，其特征是，所述的转化方法为大肠杆菌ET12567/pUZ8002介导的接合转移方法。
8.根据权利要求5所述工程菌制备方法，其特征是，所述灭活genB2基因工程菌的筛选为先获得阿泊拉霉素抗性菌株，松弛培养后再从中筛选到阿泊拉霉素敏感菌株，再通过PCR验证得到genB2基因阻断工程菌。
9.根据权利要求5所述的一种产庆大霉素C2a工程菌的制备方法，其特征在于：所述的鉴定为采用薄层层析法、高效液相分析和MS分析其代谢产物。
10.一种如权利要求1所述的一种产庆大霉素C2a工程菌在制备抗菌药物和抗生素药物中的应用。
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