[发明专利]一种用于儿童急性淋巴细胞白血病基因分型的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，涉及一种用于儿童急性淋巴细胞白血病基因分型的试剂盒，特别涉及一种基于GeXP多重基因表达遗传分析系统用于儿童急性淋巴细胞白血病基因分型的引物对组及其试剂盒。

背景技术

儿童白血病是儿童期最常见的恶性肿瘤和最常见的死亡原因之一，其中儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)是最常见的类型，占儿童白血病的75％～80％。上世纪末，由于多药联合强化疗及强有力的支持治疗，儿童ALL治愈率在发达国家已达90％以上，但近30年来ALL治愈率无明显提高。主要原因是白血病发病机理不清、缺乏合理的分子分型、很难实施特异性和个性化治疗。

目前儿童ALL主要采用形态学(morphology)、免疫学(immunology)、细胞遗传学(cytogenetics)和分子生物学(molecular biology)的MICM分型，这是指导临床分层治疗的主要依据。由于受到技术设备及高昂费用等原因限制，国内MICM分型只在大城市的部分教学医院开展，使得儿童白血病得不到正确的诊断分型，严重影响了疾病的合理治疗，造成了许多不必要的并发症、复发甚至死亡。同时，长期临床实践发现，一半以上的儿童ALL至今无法检出染色体易位或融合基因。即使检出相同融合基因的患儿、采用相同的治疗方案也会出现不同的治疗反应，说明具有相同MICM分型的ALL还具有更微观水平的区别。因此探索新的基因分型方法、深入挖掘白血病发病机制，以指导临床合理危险度分型已成为儿童白血病个性化治疗的迫切需要。

本发明的发明人团队前期通过100例儿童ALL基因表达谱芯片筛选出62个与临床亚型密切相关的分型基因，可准确将儿童ALL分成7个亚型，与MICM常规分型的符合率达97％(参见中国专利，申请号为200910082657.6，授权公告号为CN101525667B)。虽然基因芯片表达谱检测具有诊断快速、准确和信息综合分析等优点，但芯片制备、样本杂交、荧光扫描等需要特殊的仪器设备，让每家单位都能购置配备的可能性很小。此外，昂贵的价格、复杂的分析方法使得芯片在临床应用上面临巨大的困难。

GeXP多重基因表达遗传分析系统(GenomeLab Gene Expression Profiler Genetic Analysis System,GeXP)已广泛应用于生命科学的各个研究领域。它具有简便快捷、产率高效、敏感特异、实验成本低及检测周期短等优点。该技术原理与普通PCR相同，区别是在同一反应体系中可以同时扩增出多个不同长度的荧光标记核酸片断，通过毛细管电泳读取技术对多个目的基因进行有效分析。该技术一次可以确定多达30个基因的表达谱。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于儿童急性淋巴细胞白血病基因分型的试剂盒。

本发明所提供的试剂盒，适用于采用GeXP多重基因表达遗传分析系统，通过3个扩增反应对57个儿童急性淋巴细胞白血病的分型基因(其中PBX1基因在GeXP系统中设计两对引物，实则58对引物)进行检测。

所述试剂盒中含有引物对组，所述引物对组可为引物对组甲，也可为引物对组乙。

所述引物对组甲由引物对组A、引物对组B和引物对组C组成，每个引物对组对应于1个GeXP扩增反应。

所述引物对组A含有如下20个引物对：20个正向引物的序列分别为：序列1至序列20均去除自5’末端起的18个核苷酸后所形成的20个序列；与所述20个正向引物相匹配的反向引物的序列依次分别为：序列21至序列40均去除自5’端末端起的19个核苷酸后所形成的20个序列；

所述引物对组B含有如下18个引物对：18个正向引物的序列分别为：序列41至序列58均去除自5’末端起的18个核苷酸后所形成的18个序列；与所述18个正向引物相匹配的反向引物的序列依次分别为：序列59至序列76均去除自5’端末端起的19个核苷酸后所形成的18个序列；

所述引物对组C含有如下20个引物对：20个引物对的正向引物的序列分别为：序列77至序列96均去除自5’末端起的18个核苷酸后所形成的20个序列；与所述20个正向引物相匹配的反向引物的序列依次分别为：序列97至序列116均去除自5’端末端起的19个核苷酸后所形成的20个序列。