[发明专利]一种越橘的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种越橘的组织培养方法，属于植物学技术领域。

背景技术

适于越橘繁殖的方式有很多种，如，扦插繁殖、根状茎扦插繁殖、分株繁殖和种子繁殖等。上述繁殖方法具有繁殖周期长、易感染真菌性病害、良种化程度降低，而劣质种苗的使用又导致越橘固有的优良特性日益丧失，这在一定程度上约束了该树种的发展和推广应用。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种培育周期短、可有效降低越橘的染病几率，提高其应用价值的越橘的组织培养方法。

为了实现上述发明目的，本发明是通过以下技术方案来实现的：

一种越橘的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）选材：在3-5月，选取生长健壮的半木质化的新稍，清水冲洗3-5次后，用滤纸吸干水分，然后，在超净工作台上，将新稍用0.1%的升汞灭菌5-10min后，用无菌水清洗3-5次，再滤纸吸干水分后备用；

（2）芽启动培养：从步骤（1）处理过的新稍上剪取1-2cm带一个饱满芽的茎段，形成外植体，将所述的外植体的基部插入芽启动培养基中，在温度为25-30℃，光照强度2000—2500 lx，光照时间12h／d的条件下，进行30-40d的培养，形成新枝；

（3）增殖继代培养：将步骤（2）所述的新枝接种在增殖继代培养基中，在温度为25-30℃，光照强度2000—2500 lx，光照时间12-16h／d的条件下，每隔40-50d继代一次，获得大量新枝；

（4）生根培养：将外植体大量增殖后的新枝转移到生根培养基中诱导生根，培养40-50d后进行炼苗移栽；

（5）炼苗移栽：将步骤（4）得到的新枝首先在培养室适应7-15d，然后在室温条件下，清水洗涤3-5次，去掉基部的培养基，然后移栽到大棚内的苗盘中，保持空气相对湿度在80%以上，然后驯化炼苗30-35d后进行常规管理。

进一步，所述的芽启动培养基包括：改良MS + 0.05～0.1 mgL^-1BA + 1.0～2.0mgL^-1ZT + 1.0～2.0gL^-1琼脂 + 10gL^-1蔗糖, 且pH值为5.2。

所述的增殖继代培养包括改良MS + 1.0～2.0mgL^-1BA + 1.0～2.0mgL^-1ZT  + 0.1～0.2mgL^-1NAA + 1.0～2.0gL^-1琼脂 + 10gL^-1蔗糖, 且pH值为5.2。

而所述的生根培养基包括1/2改良MS + 0.05～0.1mgL^-1 IBA + 0～0.01mgL^-1NAA + 0.6～1.0gL^-1琼脂 + 10gL^-1蔗糖, 且pH值为5.2。

且，上述的改良MS包括常量营养元素、微量营养元素和有机试剂。

其中，所述的常量营养元素的组分和其对应的浓度为：硝酸钾190mg/L；硫酸铵165mg/L；七水硫酸镁350 mg/L；四水硝酸钙680mg/L；无水磷酸二氢钾100mg/L；乙二胺四乙酸二钠73.4mg/L；七水硫酸亚铁18.5 mg/L。

所述的微量营养元素的组分和其对应的浓度为：四水硫酸锰15.6mg/L；硫酸锌2.0mg/L；硼酸3.5 mg/L；碘化钾0.5mg/L；钼酸钠0.3mg/L；氯化钴0.05 mg/L，硫酸铜0.02 mg/L，

所述的有机试剂的组分和其对应的浓度为：盐酸硫胺素0.1 mg/L；烟酸1.5 mg/L；盐酸吡哆醇1.5mg/L；肌醇100.0 mg/L。

本发明的有益效果是：本发明所述的越橘的组织配方方法通过改良基本培养基的成分及含量，同时辅助合理的培养方法，使得越橘的外植体繁殖速度快、繁殖周期短且繁殖率高、成活率高、不易感染真菌性病害、良种化程度高，以使得最终培育得到的越橘具有良好的推广和应用价值。

具体实施方式

下面将结合具体实施例，详细说明本发明的具体实施方式：

在本实施方式中，所有实施例中采用的改良MS均包括常量营养元素、微量营养元素和有机试剂，