[发明专利]miRNA-28化合物作为慢性疼痛标志物和在制备治疗慢性疼痛药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种微小RNA分子的用途,尤其是涉及miRNA-28用途,具体是miRNA-28化合物作为慢性疼痛标志物和在制备治疗慢性疼痛药物中的应用，属于生物医学材料技术领域。 

背景技术

慢性疼痛是临床上最常见和高发疾症之一，据统计，全球慢性疼痛的患者高达3.2亿。中枢神经系统(central nervous system,CNS)或周围神经系统(peripheral nervous system,PNS)的损伤或创伤、感染、炎症等均会引起慢性疼痛。主要的临床表现为自发痛、痛觉过敏和异常性疼痛，由于病因复杂、发病机制尚不明确，治疗非常困难。而长期慢性疼痛患者易产生焦虑、忧郁、失眠等症状，且耗费大量的医疗资源，严重影响着人们的生活质量。目前采用的药物治疗及介入手术治疗均有长期效果不理想的缺陷。因此，深入探索疼痛发生、发展的分子机制，明确其长期持续的原因，确立疼痛治疗靶点，寻求新的干预策略对提高疼痛治疗效果有着深远的意义。 

MicroRNA是一类长度为19-25个核苷酸大小的内源性单链RNA，它们在转录后水平沉默基因的翻译从而对生物体基因表达起到了精细调节的作用。如果miRNA与靶mRNA的3’非翻译区匹配完全或接近完全，则该复合体降解靶mRNA；若两者序列部分匹配则通过抑制靶mRNA的翻译来沉默特定基因表达。 

神经细胞中含miRNA较其他组织细胞多，miRNA在突触部位的选择性聚集或缺失，可以调节突触局部的基因表达和蛋白合成，影响神经细胞突触功能。神经系统疾病，比如帕金森、精神分裂症、老年痴呆、亨廷顿病、神经母细胞瘤等都与miRNA表达和功能异常相关。 

关于miRNA-28作为一种抑制慢性疼痛基因的用途和作为慢性疼痛诊断的一种标志物的用途目前尚未见报道。 

发明内容

为解决上述问题，本发明提供一种应用miRNA-28化合物作为慢性疼痛标志物和在制备治疗慢性疼痛药物中的应用。 

目的在于提供miRNA-28化合物作为慢性疼痛疾病临床诊断标志物的用途。 

另一目的在于提供miRNA-28化合物作为治疗慢性疼痛药物的用途。 

首先采用荣光定量PCR方法对多个神经组织特异表达miRNA进行了检测，结果表明miRNA-28在CFA慢性疼痛大鼠的背根神经节中出现下调表达，见图1。采用原位杂交观察到了miRNA-28在大鼠脊髓中的明显表达，见图2。采用慢病毒介导的过表达技术检测到，当CFA慢性疼痛大鼠脊髓miRNA-28过表达时，其疼痛域值明显上升，见图3；而在正常大鼠miRNA-28下调表达时，大鼠疼痛域值明显降低，见图3。 

进一步通过靶标预测软件分析发现，Nnat的3’端UTR区含有miRNA-28的结合位点，见图4。并采用荧光素酶报告基因方法，验证了miRNA-28作用靶标Nnat，见图5。利用蛋白质免疫印迹检测到CFA大鼠Nnat表达出现明显上调，见图6，该趋势与miRNA-28表达相反。同时，在CFA模型鼠中，过表达miRNA-28时，Nnat表达出现明显下调。上述结果表明，miRNA-28通过Nnat信号通路调控慢性疼痛的发生和维持。 

最后，本发明探讨了miRNA-28在慢性疼痛诊断中的意义。对miRNA-28在慢性疼痛病人血液中的表达进行了定量检测。样本包括正常组12例，慢性和轻微疼痛组12例。研究证实miRNA-28在慢性疼痛病人中表达水平均出现显著下调(图7)。蛋白质免疫印迹分析表明Nnat在慢性疼痛病人血样中表达均明显上调，进一步证实了慢性疼痛病人中Nnat与miRNA-28存在与动物实验同样的相互作用关系。 

本发明首次发现miRNA-28在慢性疼痛发生和维持过程中均能通过调控Nnat信号传导通路进行。作为疼痛抑制基因，miRNA-28能显著抑制慢性疼痛的发生。对慢性疼痛病人的血样标本进行定量分析发现，miRNA-28在病人血样中的表达也是明显下调。研究结果表明通过检测或干涉神经中枢中miRNA-28的表达可为慢性疼痛的诊断或治疗提供新的方案。 

附图说明

图1是miRNA-28在CFA疼痛模型中脊髓水平差异表达。