[发明专利]一种用于诊断先天性骨髓衰竭性疾病的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种试剂盒，特别涉及一种用于诊断先天性骨髓衰竭性疾病的试剂盒。

背景技术

先天性骨髓衰竭综合征(Inherited bone marrow failure syndromes,IBMFS)是一组以骨髓衰竭、先天畸形及易发生肿瘤为主要表现的疾病的总称。IBMFS包括范可尼贫血(Fanconi anemia,FA)、先天性角化不良(Dyskeratosis congenita,DC)、Shwachman-diamond综合征,(SDS)、无巨核细胞性血小板减少(Amegakaryocytic thrombocytopenia)、先天性纯红细胞再生障碍性贫血(Diamond-blackfan anemia,DBA)、网状组织发育不良(Reticular dysgenesis)、家族性再生障碍性贫血(Familial aplastic anemia)、伴挠骨缺失的血小板减少症(TAR)、严重的先天性中性粒细胞减少症等^[1]。诊断这些疾病的重要依据是较典型的临床表现，但有1/3IBMFS患者缺乏临床特异性表现，且有部分患者在成人时才发病。另外，即使利用一些较特殊的检测手段如彗星及MMC等检测方法也易出现假阳性结果，而且漏诊率较高^[2]。随着测序技术的发展，人们发现部分IBMFS患者会出现特有的基因突变，并通过测序方法对其进行检测以实现临床诊断。临床上所选择测序基因大多是根据临床表现，推测患者为某种疾病后制定的^[3]，很可能出现漏诊的情况。另外，临床所用测序技术多为一代测序，其费用较高，很难广泛应用于临床。

高通量测序技术(High-throughput sequencing)，也称下一代测序技术(Next-generation sequencing technology)，是基因组学研究领域一个具有里程碑意义的方法。该技术使得核酸测序的单碱基成本与第一代测序技术相比急剧下降，如第一代测序方法进行人类基因组测序需花费30亿美元，而第二代测序仅需万(美)元。如此低廉的单碱基测序成本使得我们可以实施更多物种的基因组计划从而解密更多生物物种的基因组遗传密码，同时在已完成基因组序列测定的物种中对该物种的其他品种进行大规模地全基因组重测序也成为了可能。近年来，人们结合第二代测序与微阵列技术而衍生出来的应用方法—目标序列捕获测序技术(Targeted Resequencing)即高通量捕获测序技术，为临床诊断疾病提供了可行的方法。这项技术首先利用微阵列技术合成大量寡核苷酸探针，这些探针能够与基因组上的特定区域互补结合，从而富集到特定区段；然后用第二代测序技术对这些区段进行测序，一般多采用Illumina HiSeq2000Sequencer技术进行测序；最后通过生物信息学方法对结果进行分析，总结患者相关疾病突变基因情况，为临床提供了较快速、准确、廉价的诊断方法。

[1]竺晓凡.儿童骨髓衰竭综合征.实用儿科临床杂志，2007,22(3)：165-167。

[2]van der Lelij P,Oostra AB,Rooimans MA,et al.Diagnostic overlap between Fanconi anemia and the Cohesinopathies:Roberts Syndrome and Warsaw Breakage Syndrome.Anemia.2010；2010:565268.

[3]Gille JJ,Floor K,Kerkhoven,et al.Diagnosis of fanconi anemia:mutation analysis by multiplex ligation-dependent probe amplification and PCR-Based sanger sequencing.Anemia.2012；2012:603253.

鉴于先天性骨髓衰竭综合征诊断较困难及目前测序方法昂贵的现状，本发明提供一种IBMFS高通量捕获测序诊断试剂盒，利用高通量捕获测序技术，为临床提供全面、快捷及经济的诊断方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种用于诊断先天性骨髓衰竭性疾病的试剂盒，该试剂盒对诊断IBMFS的敏感性及特异性均较高，可用于临床。

本发明所采用的技术方案为：

一种用于诊断先天性骨髓衰竭性疾病的探针组合物，该探针组合物包括如下表1所示的279种经过生物素标记的基因探针：

表1