[发明专利]基于膜材料的农药多残留可视化检测芯片制备法和使用法

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于膜材料的农药多残留可视化芯片及其制备方法和使用方法，该芯片可实现对农产品和环境样本中多种有机磷农药、氨基甲酸酯类农药、拟除虫菊酯类农药及烟碱类农药直接进行快速定性及半定量检测。 

背景技术

农药是农业生产中用于防治农作物中病、虫、杂草等不可缺少的物质，对保障和促进农业稳产增收有极其重要的作用。然而，由于长期不合理使用，农药污染及多残留超标问题越来越严重，食品安全问题也逐渐成为人们的关注的焦点。目前，我国农药残留检测主要依赖仪器分析，如气相色谱法(GC)、液相色谱法(LC)、气相-质谱联用法(GC-MS)及液相-质谱联用法(LC-MS)。此类方法不仅需要价格昂贵的仪器及具专业技能的操作人员，而且耗时较长、不能实现现场快速检测。另外，尽管侧向层析金标试纸条可弥补仪器分析法这一缺陷，但有综述(Dzantiev,B B,Byzova,N A,Urusov,A E and Zherdev,A V.Immunochromatographic methods in food analysis[J].Trends in Analytical Chemistry,2014:81-93)表明，由于试纸空间尺寸和层析动力学的受限，实际使用时侧向层析金标试纸条上平行设置的T线(检测线)不宜多于5条，也就是说一个金标试纸条一般最多只能检测5种(类)目标分析物。然而，随着新农药的不断研发，农药种类和数量日趋增多，传统的侧向层析金标试纸条已不能满足多种农药现场检测需要。 

生物芯片技术是自20世纪90年代迅猛发展起来的一门科学技术，具有微型化、高通量、自动化等特点。生物芯片主要分为两类：基因芯片和蛋白芯片，其中蛋白芯片在实际应用中以抗体芯片研究最多。抗体芯片或称免疫芯片，在化学分析中主要依赖“抗原-抗体”特异性结合这一原理，直接或间接法检测样品中的化合物。目前，免疫芯片技术在农兽药等小分子污染物残留分析中已有陆续报道。如中国专利(CN103558257A)报道了一种基于阵列式传感器的农药多残留检测仪，它是在各工作电极上固定不同的农药抗体，与实际样品接触后，根据各个传感器阻抗值的变化来确定农药是否超标，并确定农药的种类。中国专利(CN103439514A)报道了一种基于微阵列检测芯片的农兽药多残留的检测方法，它是用生物芯片点样仪将单克隆抗体点样到玻片固相载体上，检测时将样品与荧光标记的农兽药半抗原-OVA混合，并与芯片孵育，最后用芯片扫描仪检测结果。中国专利(CN101782580A)公开 了一种用于多种兽药残留检测的蛋白芯片及其试剂盒，通过在基片上点样多种兽药抗体，并结合化学发光可同时检测秋水仙碱、二甲硝咪唑等8种兽药。中国专利(CN1715923)公布了一种用于快速检测食品、农副产品中兽药残留物的蛋白芯片，它是在固相载体上包被兽药偶联抗原，然后将样品与生物素化的抗体混合并与该芯片仪器孵育反应，最后加亲和素化的胶体金进行放大显色，通过CCD扫描获得灰度值，图像越黑代表样品中兽药含量越低，反之，越高。然而，以上这些专利报道均需要配套的信号监测设备仪器(生物芯片扫描仪、CCD检测仪等)，成本相对较高，仍不能满足目前农产品安全领域中大批量样品农药多残留现场速测的要求，很难普及应用到人们的日常生活中。 

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种使用方便、成本低廉的基于膜材料的农药多残留可视化检测芯片的制备方法和使用方法。本发明的检测芯片是一种可同时检测多种(类)农药残留的可视化芯片。 

为了解决上述技术问题，本发明提供一种基于膜材料的农药多残留可视化检测芯片的制备方法，以硝酸纤维素膜为载体，将检测点(农药半抗原-载体蛋白偶联物)及质控点(羊抗鼠IgG和溶剂对照)点样(按顺序点样)在载体上形成点阵列(需要置37℃温箱中干燥30min)，洗涤液洗涤并晾干后，用牛血清白蛋白(BSA)封闭未结合的区域，再用洗涤液洗涤后晾干；得农药多残留可视化检测芯片(即形成可用的膜芯片，亦称：可视化检测芯片)。 

作为本发明的基于膜材料的农药多残留可视化检测芯片的制备方法的改进：所述质控点分为阳性质控点和阴性质控点；所述阳性质控点为：羊抗鼠IgG；所述阴性质控点(即溶剂对照)为0.01M磷酸盐缓冲液PBS(pH7.4)； 

所述检测点为农药半抗原-鸡卵清蛋白(OVA)偶联物。