[发明专利]以甘蔗汁为原料用肠膜明串珠菌发酵产甘露醇的方法

权利要求书

1.以甘蔗汁为原料用肠膜明串珠菌发酵产甘露醇的方法，其特征在于步骤如下：

第一步，以甘蔗汁-红糖为原料制备培养基：

（1.1）准备用具：

将夹有0.2μm滤膜的滤器A用牛皮纸包装好，然后与封口的100mL三角瓶一起放入高压灭菌锅内，于121℃灭菌20分钟，准备好灭菌的夹有0.2μm滤膜的滤器A和灭菌的100mL三角瓶；

（1.2）榨甘蔗汁：

称取3350克甘蔗，去皮后切成条状，放入果汁机中榨取甘蔗汁；

（1.3）甘蔗汁的离心与过滤：

取上一步（1.2）制得的1050mL甘蔗汁液用转速为13000转/分的离心机离心30分钟，取得甘蔗汁上清液A 1010mL；再把甘蔗汁上清液A用夹有0.2μm滤膜的滤器B过滤而获得甘蔗汁滤液B 1005mL；

（1.4）添加红糖获得甘蔗汁-红糖滤液：

往上述甘蔗汁滤液B 1005mL中加入红糖2.5克并搅拌使其完全溶解，从而获得甘蔗汁-红糖滤液C；

（1.5）冷灭菌：

在超净工作台的酒精灯附近将上述步骤（1.4）制得的甘蔗汁-红糖滤液C用上述步骤（1.1）准备好的灭菌的夹有0.2μm滤膜的滤器A过滤，制备得到无菌的甘蔗汁-红糖滤液D 1000mL，在上述步骤（1.1）准备好的灭菌的100mL三角瓶中加入刚制备得到的无菌的甘蔗汁-红糖滤液D 40mL后封口，作为下一步的培养基待用；

第二步，用肠膜明串珠菌发酵产甘露醇：

（2.1）活化肠膜明串珠菌菌种：

将肠膜明串珠菌以1%接菌量加入到已经置于50mL的三角瓶内的10mL MRS培养基中，振荡培养12～16小时；

（2.2）接肠膜明串珠菌：

在超净工作台的酒精灯附近将上述步骤（2.1）活化好的肠膜明串珠菌菌种以1%接菌量加入到上述步骤（1.5）经冷灭菌制得的置于100mL三角瓶内的甘蔗汁-红糖滤液D 40mL中；

（2.3）培养制得发酵液：

将上述步骤（2.2）接肠膜明串珠菌后的三角瓶置于摇床中，在30℃下以120转/分的速度振荡培养24小时，制得发酵液40mL；

（2.4）分离纯化：

将上述步骤（2.3）培养制得的发酵液40mL用转速为10000转/分的离心机离心10分钟，去除菌体沉淀得发酵上清液A 37mL；在发酵上清液A 37mL中加入等量体积的乙醇，用转速为12000转/分的离心机离心15分钟，去除葡聚糖沉淀得发酵上清液B 74mL，将发酵上清液B 74mL在4℃结晶即制得甘露醇1.16克。