[发明专利]KE修饰的β-咔啉,其制备,纳米结构,活性和应用

说明书

技术领域

本发明涉及1-(4-羟基-3-甲氧羰基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Lys-Glu。涉及它的制备方法，涉及它的纳米结构，涉及它的体内外抗肿瘤作用，涉及它抗肿瘤细胞粘附侵袭和迁移的作用，进一步涉及它的抗炎作用。本发明属于生物医药领域。

技术背景

恶性肿瘤严重威胁人类的健康。除了自身对肿瘤患者的预后恶劣之外，恶性肿瘤并发的炎症和转移进一步恶化患者的预后。例如，超过90％以上的恶性肿瘤患者都是死于肿瘤转移。肿瘤转移依赖于4个因素：1)肿瘤细胞表面形成微血栓，逃避巨噬细胞吞噬，通过血液循环迁移到远端；2)迁移到远端的肿瘤细胞粘附到血管壁；3)细胞粘附到血管壁的肿瘤细胞通过侵袭出血管而进入正常组织；4)炎症使进入正常组织的肿瘤细胞成长为转移的新生肿瘤。

由于现有抗肿瘤药物不具备抗炎症、抗血栓和抗转移作用，所以疗效不理想。发明同时具有抗肿瘤、抗炎症和抗肿瘤转移作用的药物是临床的迫切需求。

RGD四肽，即RGDS，RGDF和RGDV是整合素α_Vβ₃的阻断剂，具有抗血栓和抗细胞粘附活性。Lys-Glu(KE)在1μM浓度下则能抑制HCCLM6的运动和侵袭。。申请人曾经把它们与雌激素偶联，制备没有凝血副作用的抗骨质疏松剂。申请人曾经把它们与四氢-β-咔啉-3-羧酸偶联制备高效的抗血栓剂。申请人也曾经用氨基酸修饰四氢-β-咔啉-3-羧酸、β-咔啉-3-羧酸及1-位取代的β-咔啉-3-羧酸，包括1-位取代的四氢-β-咔啉-3-羧酸或1-位取代的β-咔啉-3-羧酸制备高效的抗血栓剂或抗肿瘤剂。下面是发明人创造的结构类型的代表。尽管发明人付出了大量研究精力，筛选了数百种化合物，一直没有得到同时具有抗肿瘤、抗炎症和抗肿瘤细胞迁移粘附和侵袭作用的化合物。

发明人在分析数百种化合物的结构及活性变化的基础上，认识到将Lys-Glu与1-(4-羟基-3-甲氧羰基苯基)-β-咔啉-3-羧酸偶联，形成的化合物会同时具有抗肿瘤、抗炎症和抗肿瘤细胞迁移粘附和侵袭作用。基于这个认识，发明人提出了本发明。

发明内容

本发明的第一个内容是提供下面结构的1-(4-羟基-3-甲氧羰基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Lys-Glu。

本发明的第二个内容是提供1-(4-羟基-3-甲氧羰基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Lys-Glu的制备方法，该方法包括：

(1)在浓硫酸存在下，5-甲酰水杨酸在甲醇中微波90℃反应2h，生成5-甲酰水杨酸甲酯；

(2)在多聚磷酸的存在下，L-色氨酸和苯甲醇反应，生成L-色氨酸苄酯；

(3)在三氟醋酸存在下，在二氯甲烷中5-甲酰水杨酸和L-色氨酸苄酯缩合为1-(4-羟基-3-甲氧羰基苯基)-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯；

(4)在2，3-二氯-5，6-二腈基-1，4-苯醌(DDQ)的存在下，1-(4-羟基-3-甲氧羰基苯基)-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸苄酯在四氢呋喃(THF)中氧化为1-(4-羟基-3-甲氧羰基苯基)-β-咔啉-3-羧酸苄酯；

(5)在Pd/C和H₂存在下，在甲醇中1-(4-羟基-3-甲氧羰基苯基)-β-咔啉-3-羧酸苄酯反应生成1-(4-羟基-3-甲氧羰基苯基)-β-咔啉-3-羧酸；

(6)在DCC和HOBt存在下，在干燥THF中反应，得到全保护多肽序列Boc-Lys(Z)-Glu(OBzl)-OBzl；

(7)在冰浴下盐酸的乙酸乙酯溶液(4N)中，全保护多肽序列Boc-Lys(Z)-Glu(OBzl)-OBzl脱除Boc得到Lys(Z)-Glu(OBzl)-OBzl；

(8)在DCC和HOBt存在下，1-(4-羟基-3-甲氧羰基苯基)-β-咔啉-3-羧酸在无水THF中与Lys(Z)-Glu(OBzl)-OBzl缩合为1-(4-羟基-3-甲氧羰基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Lys(Z)-Glu(OBzl)-OBzl；

(9)在Pd/C和H₂存在下，在甲醇中化合物1-(4-羟基-3-甲氧羰基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Lys(Z)-Glu(OBzl)-OBzl反应得到1-(4-羟基-3-甲氧羰基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Lys-Glu。

本发明的第三个内容是测定1-(4-羟基-3-甲氧羰基苯基)-β-咔啉-3-甲酰-Lys-Glu的纳米结构。