[发明专利]一种海燕胶原蛋白肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种。胶原蛋白肽的制备方法，特别是一种海燕胶原蛋白肽的制备方法。

背景技术

胶原蛋白现已广泛应用于食品、化妆品、营养保健品、医用材料等，长期以来，牛、猪的皮和骨中的胶原蛋白一直是工业用胶原蛋白的主要来源。近些年来，世界各国都在积极寻找更安全的胶原蛋白来源，从海洋生物中提取安全、卫生、无公害的胶原蛋白逐渐成为各国研究的热门课题，如利用鱼皮、水产品加工废弃物、海蛰、多棘海盘车提取胶原蛋白的研究也有不少报道。

海燕（Asterina pectinifera）属海星纲有棘目海燕科，常见于我国黄海、渤海一带，是分布广泛的海洋生物资源之一。海燕不同于海盘车，它的体壁较宽厚，韧性极强，含有丰富的胶原蛋白和微量元素。目前从海盘车中提取胶原蛋白的报道较多，所产生的废液一方面会对环境造成污染，另一方面废液中的微量元素为无机物，无法直接给人体使用，仅能作为工业生产的原料使用，造成一定的浪费。海星棘皮中这些微量元素及生物活性物质，有助于动物的生长发育，已经有养殖企业现已用作饵料添加成分养殖牙鲆。

    海燕、海盘车广泛分布于黄海、渤海一带，是扇贝养殖的敌害，特别是对于大量底播的扇贝，在养殖过程中很易被海燕、海盘车扑食。其年产量仅在大连海区就达到了近1000吨，严重危害了扇贝的养殖，如果能够对其进行定期扑捞并综合利用，一方面可以充分利用其资源，另一方面还可避免其对沿海周边造成的环境污染。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述不足，提出一种海燕胶原蛋白肽的制备方法，该方法在制备过程中不会对环境造成污染，并且能够产生富含有机微量元素的副产品，可实现对海燕这一资源的综合利用。

本发明的技术解决方案是：一种海燕胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述的方法按照以下步骤进行：

以海燕酶促溶性胶原蛋白为原料，采用碱性蛋白酶和Alcalase酶进行酶解，且碱性蛋白酶与Alcalase的酶活的比例为5:1，酶解温度为40-50℃，酶解时间为8-10h，酶解pH9-10.5，酶加量为4500-5500U/g，获得海燕胶原蛋白肽，凝胶筛分Sephdex G-50筛分估算该海燕胶原蛋白肽的分子量分布为1.5-11.5kDa。

所述的海燕酶促溶性胶原蛋白按照以下步骤处理后获得：

首先将新鲜的海燕去除内脏，清洗干净，切段并冷冻干燥，然后将经过干燥处理后的海燕段浸泡在0.6-0.7mol/L的乙酸溶液中进行脱灰质处理，海燕段与乙酸溶液的质量体积比为1g：8-10mL，获得一次混合溶液，对一次混合溶液进行间隔搅拌处理，每次搅拌时间5-15min，间隔时间0.5-1h，每20-24h将一次混合溶液中的乙酸溶液抽出，并重新向沉淀中加入与抽出乙酸溶液等量的新的乙酸溶液，间隔搅拌处理时间为80-96h，对间隔搅拌处理后的一次混合溶液离心并取沉淀，沉淀为脱除灰质的海燕体；

将脱除灰质的海燕体放入15-20℃、pH2.0-2.5的乙酸溶液中，海燕体与乙酸溶液的比例为1g：15-20mL，同时向乙酸溶液中加入海燕体重量4%的胃蛋白酶，获得二次混合溶液，在15-20℃的条件下对二次混合溶液进行组织捣碎5-15min，放置浸提40-48h，然后对处理后的二次混合溶液在5000r/min的转速下离心处理30min，向上清液中加入NaCl使NaCl在上清液中的终浓度达到2.5mol/L，并静置上清液24h，然后在10000r/min的转速下离心处理30min，将沉淀透析脱盐后冷冻干燥，获得酶促溶性胶原蛋白。

本发明同现有技术相比，具有如下优点：

本发明所公开的海燕胶原蛋白肽的制备方法，相比于传统的利用海产品制备胶原蛋白肽的方法，由于其脱除灰质的过程中采用乙酸溶液，因此脱除灰质后所产生的废液中含有大量的有机微量元素，不同于传统方法中会产生大量无极微量元素，这种废液经处理后，可留作综合利用制备微量元素系列产品的原料，达到了废物利用、节省成本的目的；并且这种方法不会对周围的环境造成污染，是一种清洁、绿色的胶原蛋白肽的制备方法。该方法在保持了较高的肽获得率的同时，对羟自由基还有清除的作用；因此可以说这种方法具备了多种优点，特别适合于在本领域中推广应用，其市场前景广泛，科研意义重大。

具体实施方式

下面将说明本发明的具体实施方式。

实施例一：