[发明专利]大豆葫芦巴碱合成酶及其编码基因与应用

权利要求书

1.一种蛋白，为如下(1)或(2)所示：

(1)SEQ ID No.6所示的蛋白；

(2)将SEQ ID No.6所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且功能相同的蛋白质。

2.权利要求1所述蛋白的编码基因。

3.根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于：所述编码基因为如下中至少一种：

1)SEQ ID No.5所示的DNA分子；

2)SEQ ID No.5中自5’末端起第10位至第1077位核苷酸所示的DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA分子杂交且编码权利要求1所述蛋白质的DNA分子；

4)与1)或2)或3)限定的DNA分子具有90％以上的同一性且编码权利要求1所述蛋白质的DNA分子。

4.含有权利要求2或3所述编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。

5.一种制备葫芦巴碱合成酶的方法，包括如下步骤：将含有权利要求2或3所述编码基因的重组载体导入大肠杆菌中，得到重组菌；将重组菌在含有氨苄青霉素的LB Rich液体培养基中培养，再加入IPTG诱导蛋白表达，得到培养液；将培养液离心收集细胞，破碎细胞，亲和层析纯化蛋白即得。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述重组载体是将SEQ ID No.5所示的DNA分子插入pMal-c2x载体的多克隆位点得到的；

所述多克隆位点具体为EcoR I和Xba I酶切位点。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述大肠杆菌为大肠杆菌BL21(DE3)pLysS；

所述氨苄青霉素在所述LB Rich液体培养基中的浓度为50μg/mL-100μg/mL，具体为100μg/mL；

所述培养的条件为37℃，振荡培养至OD₆₀₀＝0.6-0.8，具体为OD₆₀₀＝0.8；

所述IPTG在所述培养液中的浓度为0.2g/L-0.5g/L，具体为0.2g/L；

所述诱导蛋白表达时的培养条件为16℃，振荡培养；

所述LB Rich液体培养基的配制方法如下：10g蛋白胨,5g酵母提取物,5g NaCl,2g葡萄糖，溶解在ddH₂O中，再用ddH₂O定容至1L，灭菌。

8.根据权利要求5-7任一所述的方法，其特征在于：所述亲和层析纯化蛋白所用的树脂为可以结合MBP标签蛋白的树脂；

所述树脂具体为Amylose树脂。

9.权利要求1所述的蛋白、权利要求2或3所述的编码基因在制备葫芦巴碱合成酶中的应用。

10.权利要求1所述的蛋白、权利要求2或3所述的编码基因在制备葫芦巴碱中的应用。