[发明专利]一种荧光探针、人体尿液中柠檬酸盐的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于化学技术领域，具体涉及一种荧光探针、人体尿液中柠檬酸盐的检测方法。

背景技术

柠檬酸盐(枸橼酸盐)是人体泌尿系结石形成的抑制剂之一。柠檬酸盐通过在结石表面的一系列复杂的生理过程来阻碍结石长大与聚集。低枸橼酸尿症的是指24小时尿液中枸橼酸盐排泄量小于1.8mmol的症状，这在泌尿系结石病人中很常见。服用枸橼酸钾类药物能够明显提高人体柠檬酸盐含量，增大尿液pH值，从而达到预防和治疗结石病的目的对无症状人群尿液柠檬酸盐的普查，可以判断患上泌尿系结石病的风险，同时又可以对泌尿系结石病人的病因进行初步筛查。

目前针对人体柠檬酸盐的检测已经建立起相关的检测方法，例如酶法，分光光度法，色谱法以及毛细管电泳法。其中酶法因为具有很高的选择性而成为最常用的方法。但是酶法需要蛋白质的预处理并且需要使用多种酶。以上的这些方法均需要一系列的处理和尿液预处理过程，同时需要大型仪器作辅助，使得检测变得复杂而且成本很高。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种荧光探针、人体尿液中柠檬酸盐的检测方法。本发明使用巯基乙酸(TG A)修饰的CdTe量子点与Eu³⁺的结合体系作为荧光探针，量子点在pH7.0环境下与Eu³⁺快速结合，量子点的荧光发生猝灭，并伴随着发射峰红移，引起量子点颜色由黄色变成橙色，加入柠檬酸盐后量子点荧光强度与位移都得到回复，量子点颜色恢复至黄色。本方法具有灵敏度高，高的稳定性和选择性，前处理简单，操作简便、省时，节约了检测成本，大大简化了检测程序，整个过程只需要10—15分钟；利用线性公式可以很好的对人体尿液中柠檬酸盐进行定量检测。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种荧光探针，由巯基乙酸(TG A)修饰的CdTe量子点与Eu³⁺溶液中的Eu³⁺结合组成。

所述巯基乙酸修饰的CdTe量子点和Eu³⁺溶液的体积比为1：4；

所述Eu³⁺溶液中Eu³⁺的浓度为2×10^-5mol/L；

所述巯基乙酸(TG A)修饰的CdTe量子点的制备方法是：

在水相中合成CdTe量子点，将NaHTe作为Te源，合成中Cd²⁺：Te^2-：TGA的摩尔比定为1:0.5:2.4，具体步骤如下：

碲氢化钠(NaHTe)的制备：依次称取40mg Te粉，40mg NaHB₄置于干净反应瓶中，注入1ml二次蒸馏水，密封，放入冰箱4℃反应8小时，得到碲氢化钠；

CdTe量子点的制备与纯化：在100mL的三颈烧瓶中加入50mL水中，0.113gCdCl₂.2.5H₂O和103μL巯基乙酸(TGA)，用1.0mol/L的NaOH溶液调整pH至11；通氩气30min后，快速向溶液中注入新制的NaHTe；将溶液置于硅油浴中105℃加热回流，通过控制加热时间的长短获得发射波长为590nm的量子点；量子点采取渗析法纯化，取一定量的CdTe量子点置于渗析袋中，置于pH11的二次水溶液中，间隔2-4小时换水一次，重复3-4次，以除去Cd²⁺巯基化合物等未反应的前躯体。

一种人体尿液中柠檬酸盐的检测方法，平行取上述荧光探针若干份，分别加入pH值为7.0的缓冲溶液，然后再分别加入不同浓度的柠檬酸盐标准溶液，分别检测加入柠檬酸盐前后探针的荧光强度，根据加入柠檬酸盐前后探针的荧光强度比值和柠檬酸盐的浓度建立线性公式；再在相同条件下检测加入人体尿液前后探针的荧光强度，根据线性公式计算得出人体尿液中柠檬酸盐的含量。

本发明检测方法利用柠檬酸盐标准溶液的加入取代量子点与Eu³⁺的结合作用，使量子点荧光强度和颜色的变化得到恢复，颜色由橙色回复至黄色，由于量子点性质受pH值变化影响较大，考虑巯基乙酸(TGA)修饰的CdTe量子点在碱性或弱碱性条件较具有较好的荧光特性，而柠檬酸盐在弱酸性或中性条件下具有很强的络合作用。所以利用缓冲液调节pH值为7最为合适。