[发明专利]一种检测鼠源抗体的时间分辨免疫荧光试剂盒及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种时间分辨免疫荧光试剂盒，尤其涉及一种检测鼠源抗体时间分辨免疫荧光试剂盒；此外，本发明还涉及该检测鼠源抗体的时间分辨免疫荧光试剂盒的制备方法和应用。

背景技术

近年来，免疫诊断方法已经广泛应用于医学和生物学领域的研究，免疫诊断技术主要有以下几种类型：荧光标记免疫技术、同位素标记免疫技术、酶标记免疫技术、胶体金标记免疫技术和发光免疫技术等。鼠源抗体(尤其是鼠单克隆抗体)已广泛应用在免疫诊断试剂盒的开发和制备过程中，鼠源抗体常用于包被酶标板、芯片、胶体金颗粒、乳胶微球颗粒和磁性微球颗粒等固体载体上，然后用BSA(Bovine Serum Albumin，即牛血清白蛋白)或OVA(Ovalbumin，即鸡卵白蛋白)等其它蛋白封闭抗体未结合的载体位点，洗脱，从而完成了抗体的包被。鼠源抗体包被效果的判断标准是产品性能能否达到其设计要求或者判定标准。

由于产品的性能受到很多因素的影响，因此单纯地以产品性能能否达到设计要求或判定标准来判断在固体载体上抗体的包被效果并不科学。鼠源抗体结合在固体载体上的比率是反映抗体包被效果的一个非常重要的而且直接的指标，更直接地反映了鼠源抗体结合在固体载体上的具体抗体量，因此，亟需开发一种鼠源抗体快速定量检测新产品。

时间分辨荧光免疫分析方法(Time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)是1982年发展起来的一种新型的非放射性标记技术。TRFIA利用镧系元素金属的三价离子及其螯合物作为荧光标记，常用的镧系元素为铕(Eu)、铽(Tb)、钐(Sm)和镝(Dy)，最常用的是铕、铽，镧系元素标记物比较稳定，可以保存1-2年，克服了同位素、酶标等不稳定的缺点。TRFIA现已成为免疫检测中一项非常有应用前景的分析手段，具有操作简便、灵敏度高、示踪物稳定、不受样品自然荧光干扰、多标记、无放射性污染等优点。在抗体检测方面，时间分辨荧光免疫分析方法的检测目标物通常是针对某一抗原包括小分子抗原的抗体，一般不会采用该方法来检测某一种属动物的抗体(例如鼠源抗体)。目前，对于采用时间分辨荧光免疫分析方法定量检测鼠源抗体尚未见报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种检测鼠源抗体的时间分辨免疫荧光试剂盒，解决免疫诊断技术中定量检测未有效包被到固体载体上的鼠源抗体浓度，从而计算有效包被到固体载体上的抗体包被率，以评估包被效果，该试剂盒能够定量检测鼠源抗体，具有检测灵敏度高，操作简单，操作流程短，储存时间长等优点。此外，本发明还提供该试剂盒的制备方法和应用。

本发明的原理是竞争免疫荧光分析法，如图1所示，具体包括如下步骤：将羊抗鼠多克隆抗体包被到酶标板上，形成包被羊抗鼠多克隆抗体的酶标板1，待测样品中的鼠源抗体2先与包被在酶标板1上的羊抗鼠多克隆抗体反应(震荡、洗板)，形成鼠单克隆抗体/羊抗鼠多克隆抗体免疫复合物3，然后加入镧系元素标记的鼠单克隆抗体4反应(震荡、洗板)形成鼠源抗体/羊抗鼠多克隆抗体/镧系元素免疫复合物5，加入增强液震荡反应，在荧光检测设备如AutoDELFIA1235上读荧光信号，从而确定标准品中鼠源抗体的浓度。当镧系元素离子在荧光增强液中从鼠单克隆抗体上解离后发出强荧光，荧光强度与样品中的鼠源抗体浓度成反比，对照标准曲线即可确定样品中鼠源抗体的浓度，再按照公式“100％-鼠源抗体浓度*待检样品体积/鼠源抗体投入量*100％”计算鼠源抗体的包被率。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是一种检测鼠源抗体的时间分辨免疫荧光试剂盒，包括以下组分：

包被羊抗鼠多克隆抗体的酶标板；

镧系元素离子标记的鼠单克隆抗体标记物；

鼠单克隆抗体校准品(浓度已知，用于建立标准曲线)；

清洗液(市售商品)；

分析液(市售商品)；

增强液(市售商品)。

作为本发明优选的技术方案，所述羊抗鼠多克隆抗体的包被浓度为1-100μg/ml。

作为本发明优选的技术方案，所述镧系元素标记的鼠单克隆抗体标记物中抗体是鼠单克隆抗体，所述标记示踪物是镧系元素金属离子及其螯合物中的一种，包括铕Eu、铽Tb、钐Sm和镝Dy。

作为本发明优选的技术方案，所述镧系元素标记的鼠单克隆抗体标记物中镧系元素离子与鼠单克隆抗体的摩尔比例是6-10:1。

此外，本发明还提供了一种制备上述试剂盒的方法，包括以下步骤：

步骤1.羊抗鼠多克隆抗体包被酶标板的制备：