[发明专利]盘龙参组织培养繁殖的方法

说明书

技术领域

本发明属于盘龙参的人工栽培领域；具体涉及盘龙参组织培养繁殖的方法。

背景技术

盘龙参，兰科，盘龙参属，学名绶草(Spiranthes sinensis.(Pers.)Ames.Orch.),又名龙抱柱，盘龙草。陆生兰，高15-20厘米，茎直立，基部簇生数条粗厚肉质根。生于湿草地、山坡林下或沟边草丛中。在黑龙江省大兴安岭地区呼中、塔河、加格达奇有野生分布。盘龙参根或全草入药，主要含香豆精甙和生物碱。性甘、淡、平，滋阴益气，凉血解毒，涩精，强壮。

盘龙参自然种群很少，目前没有发现大面积的盘龙参群落，其种子在自然条件下萌发率低，给人工栽培带来困难，加之盘龙参植株小、天然数量少，有效成分难以富集，阻碍药用价值开发。目前关于盘龙参组织培养的报道很少。

发明内容

本发明的目的是提供一种以隐芽作为外植体进行人工栽培盘龙参的方法。本发明方法外殖体灭菌效果好、成活率高，丛生芽增值倍数高，组织培养苗生根率高，移栽成活率高。

本发明是通过下述技术方案实现发明目的的。盘龙参的组织培养繁殖方法是按下述步骤进行的：

步骤一、以盘龙参当年生地下隐芽为外植体，对外植体进行消毒处理，无菌水冲洗3～5遍；

步骤二、将外植体接种于初代诱导培养基中，给予2000～2500LX的光照，光照时间为12小时/天，培养温度22～24℃，培养20～25天；

步骤三、然后接种于继代增殖培养基上，在24℃～26℃条件下继代繁殖，给予2500～3000LX的光照，光照时间为16小时/天，继代周期为40～50天；

步骤四、将继代增殖培养过程中获得的丛芽分割成单株，然后转移至生根培养基中，给予1500～2000LX的光照，光照时间为10小时/天，培养温度20-～25℃，培养20～25天；

步骤五、将培养物不开口移到自然光照下锻练5～6天，然后开口练苗1～2天；然后移栽到移栽基质中，幼苗管理至成苗；即完成了盘龙参组织培养繁殖。

步骤一所述的对外植体进行消毒处理是按下述进行的：用自来水冲洗5～10分钟，用75％(体积)酒精浸泡1～2分钟，再用0.1％(质量)氯化汞浸泡4分钟。

步骤二所述初代诱导培养基：改良MS+IAA1.5mg/L+6-BA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉6.8g/L。

步骤三所述继代增殖培养基：MS+BAP2.0mg/L+GA₃0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉6.8g/L。

步骤四所述生根培养基：MS+IBA0.5mg/L+蔗糖20g/L+琼脂粉6.8g/L+活性炭5g/L。

步骤五中移栽后5-7天内保证85％～90％的空气湿度。

步骤五中用800～1000倍多菌灵或托布津喷洒3次，在移栽当天移栽完喷洒1次，之后每间隔7～10天的上午进行后2次喷洒。

步骤五幼苗管理的生长温度是18～20℃。

步骤五中所述移栽基质是质量比1：1的腐殖质和苔藓混合物。

本发明方法外殖体灭菌效果好、成活率高(在72.7％以上)，丛生芽增值倍数高(最高增殖倍数5.8倍)，组织培养苗生根率高(80％以上)，移栽成活率高(85％以上)。

本发明中盘龙参的组织培养繁殖方法可采用下述操作替换步骤三：培养温度24～26℃，先给予2500～3000LX的光照，接种继代增殖培养基的第20天用光强为1000～1500LX的红光照射10～15天，继续给予2500～3000LX的光照，光照时间均为16小时/天，继代周期为40～50天，提高了丛生芽增值倍数(最高增殖倍数10倍)。

本发明方法简捷,经济实用,可操作性强,达到了快繁的目标,可用于兰科植物盘龙参的工厂化育苗。盘龙参人工组织培养技术的研究成功,可为黑龙江省大兴安岭地区野生资源的开发利用和中药质量标准化提供技术保障。

附图说明

图1是盘龙参外殖体-地下隐芽刚刚接种照片；图2是盘龙参外殖体-地下隐芽接种15天后膨大的照片；图3是盘龙参外殖体-地下隐芽接种25天后的照片；图4是盘龙参丛生芽增殖的照片；图5是盘龙参移栽成活后盘龙参根的照片。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式中盘龙参组织培养繁殖的方法是按下述步骤进行的：

步骤一、以盘龙参当年生地下隐芽为外植体，用自来水冲洗5分钟，用75％(体积)酒精浸泡1分钟，再用0.1％(质量)氯化汞浸泡4分钟，无菌水冲洗3-5遍；