[发明专利]新的肌营养不良肌病的血清miRNA标志物

说明书

本发明提供了新的肌营养不良肌病的血清miRNA标志物。具体地，本发明提供了一种分离的miRNA或miRNA集合，所述的miRNA选自：序列如SEQ ID NO.:1所示的miRNA；序列如SEQ ID NO.:2所示的miRNA，和/或与其序列互补的miRNA。本发明还提供了包含上述序列的芯片和试剂盒。经检验证明，本发明的microRNA标志物可非常有效地区分肌营养不良患者组织样本和正常样本。而且使用本发明的microRNA可以有效的区分DMD和BMD肌营养不良肌病。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体地说，本发明涉及两个新的肌营养不良肌病的血清miRNA标志物。

背景技术

微小RNA(microRNA，简称miRNA)是近年来在线虫，果蝇和植物，哺乳动物等真核生物中发现的一种内源性的长度为22个核苷酸左右的非编码单链小RNA。它在表达上具有组织和时间的特异性，通过与靶mRNA的碱基互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行负调控，导致mRNA的降解或翻译抑制，是调节其他功能基因表达的重要调控分子。越来越多的证据表明miRNA虽然微小，但它通过与靶mRNA形成完全或者不完全互不配对从而对生物体的各种生命过程有着至关重要的作用。一些miRNA已被证明在肌肉中特异性表达，并在肌肉发育过程中发挥十分重要的作用。在肌肉分化过程中特异性miRNA通过依赖成肌决定因子MyoD，Mef2以及Myogenin的功能来调节肌肉增殖与分化之间的平衡。miR-208b和miR-499位于慢肌肌球蛋白重链基因(Myh7和Myh7b)的内含子中，他们与肌纤维的分化的类型有着密切的关系。

然而，最近的研究表明，不论是在动物或者人的循环系统中，也能够检测到miRNA的稳定存在，并且这些循环系统中的miRNA种类和数量的变化，与生物体的生理病理状况相关。由此揭示循环系统中的miRNAs具备疾病的无创诊断标志物的潜在可能性。通过血清miRNAs的发现与疾病的关系，以及对miRNAs靶向的进一步研究，进而对于一些疾病设计出新型的治疗方案。

研究miRNA的方法很多，最常用的是使用高通量的芯片来筛选特异的、本发明人所感兴趣的miRNA，然后使用低通量的方法，比如real-time PCR、否rthernblot、标记检测(荧光标记或者纳米粒子标记等)来对特定的miRNA表达进行验证，此外也可以通过原位杂交来检测特定miRNA表达的空间位置和时序性。在功能方面，可以通过k否ckdown或者过表达的方法来研究miRNA与靶基因的关系，从而阐明miRNA在生物体中的具体功能。

肌营养不良肌病是一种致死的X-连锁隐性遗传性神经肌肉疾病。他的主要病理特征是骨骼肌进行性变形坏死，纤维化，脂肪浸润，随后逐步失去行走能力最终呼吸以及心脏衰竭死亡。发病率约为1/3500活产男婴。

这种疾病是由于肌营养不良突变导致该蛋白表达缺乏引起。肌营养不良蛋白是一种细胞骨架蛋白，它将肌纤维通过细胞膜连接到周围的细胞外基质。当该蛋白缺乏时，初始损伤的肌纤维衰弱坏死，并伴随着一系列复杂的活动，包括吞噬作用，炎性细胞浸润和随后的纤维化和脂肪替代肌肉进而导致后续肌纤维的萎缩引起呼吸或心脏衰竭从而使患者过早死亡。

肌营养不良蛋白基因的突变，如果导致可以表达出功能缺陷或者数量不足的dystrophin蛋白，且患者的临床表现比较温和则称之为贝克型肌营养不良症(BMD)；如果基因突变导致dystrophin蛋白缺乏且临床表现严重的则为杜氏肌营养不良症(DMD)。

由于目前没有针对DMD患者的有效治疗方法，因此早发现，早接触协助治疗，延长其离床活动的时间对于患者来说有着更加重要的意义。因此，本领域技术人员致力于开发一种能够准确、快速检测DMD并判断其临床发展阶段的技术。

发明内容

本发明的目的就是提供一种新的、可用于区分肌营养不良肌病患者样本及正常样本的microRNA标志物及其用途。

本发明的另一目的是提供检测所述疾病的芯片和试剂盒。