[发明专利]鉴定或辅助鉴定狐狸组织和/或器官的PCR引物对及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域中鉴定或辅助鉴定狐狸组织和/或器官的PCR引物对及其应用。

背景技术

目前在国内生肉和肉制品的生产和销售领域，一些不法商贩为了牟取暴利，利用掺杂掺假等手段欺骗消费者的事件时有发生，比如用狐狸、貉子和水貂的肉冒充狗肉、牛肉和羊肉等。因此一套快速、准确鉴别肉种类，并且能够适应混合肉制品鉴定的方法，无疑会为执法人员提供了强大的技术支撑。

传统的肉制品鉴定的方法主要是基于蛋白质水平的分析，包括电泳法、免疫法、ELISA等技术。操作过程中首先需制备相应物种的抗体，然后抗原和抗体间进行免疫反应，最后通过电泳或者显色等方法进行鉴别。这类鉴别技术受蛋白质(主要起作用的部分为抗原决定簇)结构的影响很大，实际应用中经常出现的问题包括：1.热加工过程会改变蛋白质(抗原决定簇)的结构，因而无法检测热加工的肉类；2.对混合肉类的检测可能出现交叉反应，因为不同物种蛋白质的结构可能具有某种程度的相似性，检验的灵敏程度取决于制备的抗体的特异性强弱。

基于以上原因，以核酸为基础的检测方法成为近几年食品检测领域的发展方向，包括DNA分子杂交法和PCR方法等。DNA分子杂交法操作复杂，且成本较高，目前以逐渐被PCR方法所取代。PCR方法灵敏度高、特异性强，可对混合肉类进行鉴别和区分，即使掺杂少量异种肉，也能用PCR方法加以鉴别；PCR方法可用于热加工的肉制品鉴别当中，高温过程仅仅打断了核酸的片断，并不会完全降解核酸，因而热加工的肉制品当中仍然存在可扩增的模板，这在饲料工业肉骨粉来源的鉴别过程中得到了很好的证实；PCR反应迅速，结果易于观测，使得这种检测方法目前广泛应用在饲料、保健品的动物源性成分的鉴别当中。

PCR技术中，引物设计是PCR成功的关键因素，好的引物将是检测实验更加快捷，结果更加清晰。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的PCR引物对组合物。

本发明所提供的鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的PCR引物对组合物，为组合物1、组合物2或组合物3；

所述组合物1由独立包装的三个引物对组成，即由名称为clf的鉴定或辅助鉴定家犬组织和/或器官的PCR引物对、名称为vvf的鉴定或辅助鉴定狐狸组织和/或器官的PCR引物对和名称为np的鉴定或辅助鉴定貉子组织和/或器官的PCR引物对组成；所述clf由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成；所述vvf由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成；所述np由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成；所述动物为家犬、狐狸和貉子这三种动物中的三种、两种或一种；

所述组合物2由独立包装的两个引物对组成，即由名称为clf的鉴定或辅助鉴定家犬组织和/或器官的PCR引物对和名称为vvf的鉴定或辅助鉴定狐狸组织和/或器官的PCR引物对组成；所述clf由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成；所述vvf由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成；所述动物为家犬和/或狐狸；

所述组合物3由独立包装的两个引物对组成，即由名称为vvf的鉴定或辅助鉴定狐狸组织和/或器官的PCR引物对和名称为np的鉴定或辅助鉴定貉子组织和/或器官的PCR引物对组成；所述vvf由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成；所述np由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成；所述动物为狐狸和/或貉子。

上述鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的PCR引物对组合物中，所述clf、所述vvf和所述np可均独立包装。

其中，PCR引物对clf可从家犬的基因组中PCR扩增获得序列表中序列9所示的DNA片段，序列表中序列9共有688个核苷酸，其中前25位和后25位分别为序列表中序列1和序列2所示上下游引物。PCR引物对vvf可从狐狸的基因组中PCR扩增获得序列表中序列10所示的DNA片段，序列表中序列10共有375个核苷酸，其中前23位和后23位分别为序列表中序列3和序列4所示上下游引物。PCR引物对np可从貉子的基因组中PCR扩增获得序列表中序列11所示的DNA片段，序列表中序列11共有456个核苷酸，其中前23位和后20位分别为序列表中序列5和序列6所示上下游引物。