[发明专利]利用HPLC测定尼扎替丁及注射制剂中有关物质的方法

说明书

技术领域

本发明涉及尼扎替丁及注射制剂中有关物质的检测方法，具体涉及一种利用HPLC（高效液相色谱）测定尼扎替丁及注射制剂的降解产物的方法。 

背景技术

尼扎替丁(英文名称：Nizatidine、Axid、Nizax、Caemaxid)为一种强效的H₂受体拮抗剂，以噻唑环取代了雷尼替丁的呋喃环，基本化学结构与法莫替丁相似。其分子式为C₁₂H₂₁N₅O₂S₂，分子量为331.46。 

尼扎替丁是继西咪替丁、雷尼替丁之后疗效更高、不良反应更少，在消化性溃疡疾病更具竞争力的优势品种。 

尼扎替丁是一个含有氨基的噻唑类化合物，因此其在水溶液或固体存放中极不稳定，即使在室温下放置也极易产生大量杂质，给用药的安全性带来隐患，因此通过对尼扎替丁或其制剂的检测来判断其是否可用于临床在本领域非常必要的。 

现有技术中针对尼扎替丁原料标准（USP27）、尼扎替丁原料标准（BP2011）、尼扎替丁原料标准（EP7.5）、尼扎替丁胶囊标准（USP27）及尼扎替丁注射液标准 （BP2011）中有关物质测定色谱条件有较大差别，主要体现在洗脱方法和限度两个方面：1、洗脱方法的差异：尼扎替丁胶囊标准（USP27）使用等度洗脱法，而其他4个标准均为梯度洗脱法；2、洗脱流动相的差异：尼扎替丁注射液标准（BP2011）使用的流动相为醋酸铵缓冲液:甲醇=76：24或醋酸铵缓冲液:甲醇=50：50，而另外3个原料标准流动相为醋酸铵缓冲液；3、限度差异：上述4个标准中的限度有较大差别，其中USP27、EP7.5和BP2011中原料标准限度一致均为单个杂质峰面积不得过0.3%,所有杂质峰面积的和不得过1.5%；尼扎替丁胶囊（USP27）的限度为单个杂质峰面积不得过0.5%,所有杂质峰面积的和不得过1.5%；尼扎替丁注射液（BP2011）的限度为杂质E不得过2%；杂质F不得过1%；其他单个杂质峰面积不得过0.3%；其他总杂质峰面积不得过3.5%。 

本发明旨在提供一种更方便、快捷，能够准确检测尼扎替丁及其注射制剂中杂质含量的方法。本发明使用了分离效果更好的梯度洗脱法，并进行了有针对性的专属性研究；增加了杂质F的分离度检测，并创新性的增加了一个热破坏杂质的分离适用性，这两个适用性选择条件的增加可以检测到以前任何方法都检测不到的杂质：尤其是经热降解产生的主色谱峰前的一杂质，TTR=0.94；此适用性能够将与主成分峰较接近且容易重叠在一起的热降解杂质。 

发明内容

本发明提供一种快速分析分离尼扎替丁及注射制剂中的降解产物的高效液相色谱法，从而实现了尼扎替丁及其相关制剂中的有关物质在同一色谱条件下的分离测定。 

所述有关物质包括（参见表1）： 

仪器

液相色谱仪：戴安U3000高效液相色谱仪，包括四元泵（LPG-3400D）、自动进样器（WPS-3000）、柱温箱（TCC-3000RS）、DAD检测器（DAD-3000）、变色龙色谱工作站。岛津LC-10AT 系列色谱仪，包括LC-10AT VP高压输液泵、SPD-10A VP紫外检测器、LC Solution色谱工作站。

有关物质测定方法验证总结 

强制破坏试验

      检测试剂：尼扎替丁注射制剂，按照中国专利申请CN103462909A的方法自制的制剂。

流动相选择：流动相A为醋酸铵缓冲液（取5.9g醋酸铵，加水溶解并稀释至760ml，加入1ml二乙胺，用醋酸调节pH值至7.5），流动相B为甲醇。 

系统适用性样品：分别取尼扎替丁对照品和尼扎替丁杂质F对照品适量，用流动相A-B（76:24）混合液溶解并制成每1ml中各含50μg的混合溶液，量取20μl进样，记录色谱图。 

热破坏样品  精密称取尼扎替丁注射制剂内容物适量（约相当于尼扎替丁10mg），置10ml量瓶中，用流动相A-B（76:24）混合液溶解并稀释至刻度，摇匀，密封，置105℃烘箱中，加热15min后，进样，记录色谱图。