[发明专利]可可茶子叶愈伤组织培养方法

权利要求书

1.可可茶子叶愈伤组织培养方法，其特征在于包括如下步骤： 

(1)外植体制备 

材料消毒：将剥去种皮的种子置于50％漂白粉溶液中浸泡10min，用灭菌的ddH2O冲洗3-5次，每次5分钟，在超净工作台上用灭菌的吸水纸吸干种子表面的水液，把胚挑出，将每一个子叶切成50mm²小块； 

(2)愈伤组织诱导 

将(1)处理好的可可茶子叶小块接入诱导愈伤组织1号培养基中诱导愈伤组织，该诱导愈伤组织培养基为在1升SH基本培养基中加入下述的原料及其配比制成： 

蔗糖               20-40g 

琼脂粉             5.5-7.2g 

2，4-二氯苯氧乙酸  1.0-3.0mg 

pH为5.6，配制好的诱导愈伤组织培养基分装在培养瓶中，每瓶25ml，盖好瓶盖，在压力为0.1-0.15MPa下灭菌25分钟，将培养瓶置于22-26℃、光照强度为2000-3000lx的温室中培养，每天光照12-14小时，培养98天后，转入2号培养基中继续培养诱导，该诱导愈伤组织培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成： 

pH为5.6，配制好的诱导愈伤组织培养基分装在培养瓶中，每瓶25ml，盖好瓶盖，在压力为0.1-0.15MPa下灭菌25分钟，将培养瓶置于22-26℃、光照 强度为2000-3000lx的温室中培养，每天光照12-14小时，培养7天后，转入3号培养基中继续培养诱导，该诱导愈伤组织培养基为在1升SH基本培养基中加入下述的原料及其配比制成： 

pH为5.6，配制好的诱导愈伤组织培养基分装在培养瓶中，每瓶25ml，盖好瓶盖，在压力为0.1-0.15MPa下灭菌25分钟，将培养瓶置于22-26℃、光照强度为2000-3000lx的温室中培养，每天光照12-14小时，培养35天后，长出胚状芽，继续培养至叶片长出、成苗及愈伤组织褐化。 

2.根据权利要求1所述的可可茶愈伤组织培养方法，其中诱导可可茶愈伤组织培养基1号、2号、3号分别为在1升SH、MS、SH基本培养基中加入下述的原料及其配比制成： 

1号培养基 

蔗糖               25-35g 

琼脂粉             5.8-6.8g 

2，4-二氯苯氧乙酸  1.5-2.5mg 

2号培养基 

3号培养基 

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3.根据权利要求1所述的可可茶愈伤组织培养方法，其中诱导愈伤组织培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成： 

1号培养基 

蔗糖               30g 

琼脂粉             6.5g 

2，4-二氯苯氧乙酸  2.0mg 

2号培养基 

3号培养基 

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