[发明专利]杀灭革兰氏阳性菌的酶抗生素及其制备、用途

权利要求书

1.一种氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白质。

2.一种编码如权利要求1所述蛋白质的核苷酸。

3.如权利要求2所述的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸的序列如SEQ ID NO.2所示。

4.一种制备如权利要求1所述蛋白质的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，设计引物，以猪链球菌菌株基因组DNA为模板，采用PCR技术扩增相应的基因片段，片段大小为738bp；

步骤二，采用原核表达系统，将步骤一所得基因片段构建重组质粒pET-28a(+)-LySS7；

步骤三：将步骤二的重组质粒转化到表达载体中，筛选阳性克隆进行蛋白的诱导表达和鉴定，获得重组蛋白LySS7；

步骤四：采用平板裂解实验，确定步骤三获得的重组蛋白的裂菌特性；

步骤五：高效诱导表达并纯化具有裂菌活性的重组蛋白，得到具有生物活性的蛋白LySS7。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤一中，所述引物具体为：上游引物的序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物的序列如SEQ ID NO.4所示。

6.一种如权利要求1所述的蛋白在制备革兰氏阳性菌裂解药物中的用途。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述革兰氏阳性菌为多重耐药菌株猪链球菌、马链球菌兽疫亚种、金黄色葡萄球菌中的一种或几种。

8.一种使用权利要求1所述的蛋白进行裂菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：采用常规方法进行裂解；

其中，裂解使用的缓冲液包含PBS缓冲液、CH₃COOH-CH₃COONa缓冲液、NaH₂PO₄-Na₂HPO₄缓冲液、HCl-Tris缓冲液；

缓冲液浓度为10～20mM；

裂解酸度为pH4.5～8.5；

裂解温度为22～42℃。