[发明专利]冷冻鱼糜中微生物谷氨酰胺转胺酶ELISA检测方法

权利要求书

1.一种冷冻鱼糜中微生物谷氨酰胺转胺酶ELISA检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

①包被：抗MTG兔多抗用包被缓冲液进行稀释至1-3ug/mL，以每孔100uL的量加入酶标板进行包被，4℃冰箱反应12h；

②洗涤：将酶标板甩干，每孔加入200uL洗涤液，振荡3min，甩干液体并拍干酶标板，重复洗涤3次；

③封闭：每孔100uL封闭液，37℃烘箱反应1h，反应结束后重复上述洗涤步骤；④加抗原：抗原样品与样品稀释液在乳化机作用下匀浆3min，得到的浆液磁力搅拌12h，之后再6000rpm离心15min，取上清液再次离心(6000rpm 15min)，离心得到的上清液即为待测样品；每孔加入100uL待测样品，37℃烘箱反应1h，反应结束后重复上述洗涤步骤；

⑤加检测抗体：抗MTG鼠单抗用抗体稀释液进行稀释，每孔加入100uL，37℃烘箱反应1h，反应结束后重复上述洗涤步骤；

⑥加酶标二抗：酶标二抗用抗体稀释液进行稀释，每孔加入100uL，37℃烘箱反应1h，反应结束后重复上述洗涤步骤；

⑦加显色液：将显色A液、显色B液、30％H₂O₂以200:5000:1的比例混合，每孔加入100uL，37℃烘箱反应15min；

⑧加终止液：每孔加入100uL终止液，用酶标仪测定OD₄₅₀值；

⑨按①-⑧的检测方法进行操作，绘制双抗体夹心ELISA法MTG浓度测定曲线，以抗原浓度的log值为横坐标，各孔的OD₄₅₀值为纵坐标；

⑩掺假冷冻鱼糜按0.6mg/mL～10mg/mL进行稀释处理，然后按照①-⑧的检测方法进行操作，通过标准曲线计算测定浓度。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述包被缓冲液为0.05mol/LpH9.6的碳酸盐缓冲液。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗涤液为含0.05％(v/v)Tween-20的0.01mol/LpH7.4的磷酸盐缓冲溶液。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的封闭液和抗体稀释液均为含0.5％(m/v)BSA的洗涤液。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的样品稀释液为0.05mol/LpH8.0Tris-HCl缓冲液。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的显色液A液为5mg/mL的TMB二甲亚砜溶液。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的显色液B液为pH 5.0柠檬酸缓冲液。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的终止液为2mol/LH₂SO₄溶液。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤⑤中，抗MTG鼠单抗用抗体稀释液进行稀释0.05-0.15ug/mL。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤⑥中，酶标二抗用抗体稀释液进行稀释至1:5000-1:6000。