[发明专利]一种提取甘茶酚E的方法

说明书

技术领域

本发明属于中药化学技术领域，涉及一种一种提取甘茶酚E的方法。

背景技术

甘茶酚E（Thunberginol E），mp.216-217℃，分子式为C₁₆H₁₄O₆，分子量为302.28，结构式为：

 

甘茶酚E是从虎耳草科(Saxifragaceae) 甘茶 Hydrangea macrophylla Seringe var.thunbergii Makin的叶分离得到一种异香豆素类化合物。药理研究表明，甘茶酚E具有抗变态反应活性，对致敏的豚鼠支气管呈抗变态作用，对S.D.反应和化合物48/80致敏的IC50(μM)分别为37和85，在100μM时，组胺释放抑制率为97.9%；具有抗菌活性，对核粒梭(形杆)菌的MIC为30ppm，对黑色素拟杆菌的MIC为50ppm。

现有技术中，尚未见工业化制备甘茶酚E的生产工艺报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种提取甘茶酚E的方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种提取甘茶酚E的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）以甘茶叶为原料，切成段状，放入高速组织捣碎机，在转速为18000rpm条件下保持3-5min后，过40目筛备用；

（2）原料按照料液比1:12-16（g/mL）的比例加入乙醇水溶液后，再加入0.5%的纤维素酶，在超声功率700W、45℃条件下酶解60-90min，得到酶解原料；

（3）将酶解原料投入加入闪式提取器中，进行闪式提取，过滤得到提取液，浓缩干燥得到粗提物；

（4）将所得粗提物用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶柱层析纯化，氯仿-甲醇溶剂系统梯度洗脱，收集甘茶酚E流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶；

（5）将粗晶用丙酮重结晶得到甘茶酚E结晶。

所述步骤（2）中乙醇水溶液体积百分比为85%。

所述步骤（3）中闪式提取电压为150V，提取时间为3-5min。

所述步骤（4）中所述高压硅胶柱层析，硅胶目数为200目，耐压35MPa，柱内径为250mm，层析柱径高比为1：10。

所述步骤（4）中所述氯仿-甲醇的体积比为1:1-1:13。

所述步骤（5）中所述丙酮为90-100%的丙酮水溶液。

本发明的有益效果是：本发明操作简单，耗时短，得率高，易规模化生产；采用高压层析柱，上样量大，生产周期短，分离度好，产品纯度高。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

以甘茶叶为原料，切成1cm左右段状，放入高速组织捣碎机，在转速为18000rpm条件下保持5min后，过40目筛备用，称取1kg，按照料液比1:12（g/mL）的比例加入85%乙醇水溶液后，再加入0.5%的纤维素酶，在超声功率700W、45℃条件下酶解70min，得到酶解原料，加入闪式提取器中，提取电压为150V，提取时间为3min，进行闪式提取，过滤得到提取液，提取液浓缩干燥后得到粗提物，用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶（硅胶目数为200目）柱层析纯化，耐压35MPa，柱内径为250mm，层析柱径高比为1：10，氯仿-甲醇按体积比为1:1、1:6、1:13梯度洗脱，收集甘茶酚E流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶，粗晶用90%丙酮重结晶得到甘茶酚E，含量为95.2%。

实施例2：

以甘茶叶为原料，切成1cm左右段状，放入高速组织捣碎机，在转速为18000rpm条件下保持3min后，过40目筛备用，称取1kg，按照料液比1:16（g/mL）的比例加入85%乙醇水溶液后，再加入0.5%的纤维素酶，在超声功率700W、45℃条件下酶解90min，得到酶解原料，加入闪式提取器中，提取电压为150V，提取时间为5min，进行闪式提取，过滤得到提取液，提取液浓缩干燥后得到粗提物，用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶（硅胶目数为200目）柱层析纯化，耐压35MPa，柱内径为250mm，层析柱径高比为1：10，氯仿-甲醇按体积比为1:1、1:7、1:13梯度洗脱，收集甘茶酚E流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶，粗晶用100%丙酮重结晶得到甘茶酚E，含量为94.8%。

实施例3：