[发明专利]一种长尖紫玉盘内酯的制备方法及抗肿瘤应用

说明书

技术领域

本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，特别涉及一种长尖紫玉盘内酯的制备方法及抗肿瘤应用。

背景技术

长尖紫玉盘内酯（Acuminolide），分子式：C₂₀H₃₀O₅；分子量：350.46，CAS登录号：161016-98-4，分子结构式如下：

长尖紫玉盘内酯为天然化合物，是一种二萜类化合物，具有细胞毒活性，对人型癌细胞具有广的细胞毒作用，对黑色素瘤（Mel2）最有效，ED₅₀为0.7μg/ml。长尖紫玉盘内酯来源于番荔枝科(Annonaceae)长尖紫玉盘Neouvaria acuminatissima(Miq.)Airy Shaw茎皮。

通过文献检索，现有活性物质的提取大都是采用硅胶、凝胶色谱法进行分乙醇提回流提取，硅胶、凝胶色谱法进行分离等步骤。由于操作复杂，制备量较小，样品得率低，不适合长尖紫玉盘内酯的工业化制备。

发明内容

为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，，提供一种长尖紫玉盘内酯的制备方法及抗肿瘤应用。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种长尖紫玉盘内酯的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）取长尖紫玉盘茎皮，经粉碎处理，加5-12倍60-90%乙醇溶液在20-45℃的温度下进行连续逆流超声提取30-100min，过滤，得到提取液；

（2）提取液通过截留分子量为1000-3000的超滤膜超滤和截留分子量为100-500的纳滤膜浓缩，操作压力为0.5-2.8MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；

（3）采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的长尖紫玉盘内酯，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集长尖紫玉盘内酯组分；

（4）将长尖紫玉盘内酯组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得长尖紫玉盘内酯。

步骤（1）中超声频率为35-60KHz。

步骤（3）中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统的体积比为5-7:2-4:4-7:1-3。

所述制备的长尖紫玉盘内酯，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，包含中链脂肪酸盐、胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。

采用本法制备长尖紫玉盘内酯，工艺简便易操作，制备量大，产品得率高，而且低污染；添加肠吸收促进剂，有利于提高生物利用度。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1：

长尖紫玉盘内酯的制备

取长尖紫玉盘茎皮，经粉碎处理，称取1kg，加12倍60%乙醇溶液在20℃的温度下进行连续逆流超声提取100min，超声频率为35KHz，过滤，得到提取液，提取液通过截留分子量为1000的超滤膜超滤和截留分子量为500的纳滤膜浓缩，操作压力为1.8MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的长尖紫玉盘内酯，以体积比7:3:7:2石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集长尖紫玉盘内酯组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入85%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得长尖紫玉盘内酯，含量97.4%。

实施例2：

长尖紫玉盘内酯的抗肿瘤应用

1、材料

动物：昆明种小鼠，雌雄各半性，体重20±2g，由南京中医药大学提供。

细胞株：Sarcoma 180腹水型瘤株（S180），由中国科学院上海药物研究所提供。

2、方法

取50只小鼠，每只小鼠左腋下接种S₁₈₀瘤液，次日随机分成5组，每组10只，分别为生理盐水对照组（NS组）、阳性对照组、长尖紫玉盘内酯低剂量组（1mg/kg）、中剂量组（2mg/kg）、高剂量组（4mg/kg）。接种24h后长尖紫玉盘内酯给药组灌胃给药，连续7，阳性对照组试验期间腹腔注射2次，隔日给药。期间，每日观察小鼠的一般活动、皮毛、粪便等情况。最后一次给药24h后断颈处死，称重，并计算抑瘤率。