[发明专利]一种提取异别土木香内酯的方法

说明书

技术领域

本发明属于中药化学技术领域，涉及一种一种提取异别土木香内酯的方法。

背景技术

异别土木香内酯（Isoalloalantolactone），分子式为C₁₅H₂₀O₂，分子量为232.32，结构式为

 

异别土木香内酯是从菊科(Compositae) 总状土木香 Inula racemosa L.的根中分离得到一种萜类化合物。药理研究表明，异别土木香内酯具有抗真菌作用，对下列真菌的MIC(μg/mL)分别为：蠕孢≤50、腐霉125、尖镰孢200；细胞毒活性，对结肠腺癌(HT-20)，人乳腺癌(MCF-7)和人肺癌(A-549)的ED50依次为1.00μg/mL、2.00μg/mL和1.00μg/mL；植物生长调节剂，抑制千穗谷和稗的胚根伸长，其IC50分别为9.73μg/mL和55.75μg/mL，促进金黄菜豆茎切条长根。

现有技术中，制备异别土木香内酯的生产技术很少见。如中国专利“一种异土木香内酯的提纯制备方法和其在制备抗肿瘤药物中的应用”（专利申请号为200810055376.7），公开了一种异土木香内酯的提纯制备方法，工艺步骤包括：乙醇浸提、石油醚萃取、硅胶柱层析等，该发明采用传统工艺方法，有机试剂用量大，不利于环境保护，得率低，周期长。

发明内容

本发明的目的是提供一种提取异别土木香内酯的方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种提取异别土木香内酯的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）以土木香的根为原料，切成段状，放入高速组织捣碎机，在转速为18000rpm条件下保持3-5min后，过40目筛备用；

（2）原料按照料液比1:10-15（g/ml）的比例加入乙醇水溶液后，再加入0.3%的纤维素酶，在超声功率600W、48℃条件下酶解40-60min，得到酶解原料；

（3）将酶解原料投入加入闪式提取器中，进行闪式提取，过滤得到提取液，浓缩干燥得到粗提物；

（4）将所得粗提物用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶柱层析纯化，氯仿-甲醇溶剂系统梯度洗脱，收集异别土木香内酯流分，减压浓缩；

（5）将浓缩液用超临界CO₂抗溶剂结晶得到异别土木香内酯结晶。

所述步骤（2）中乙醇水溶液体积百分比为85%。

所述步骤（3）中闪式提取电压为160V，提取时间为5-10min。

所述步骤（4）中所述高压硅胶柱层析，硅胶目数为200目，耐压35MPa，柱内径为250mm，层析柱径高比为1：10。

所述步骤（4）中所述氯仿-甲醇的体积比为1:1-1:13。

所述步骤（5）中所述超临界CO₂抗溶剂结晶条件为：压力12-25MPa，温度35-55℃。

本发明的有益效果是：本发明操作简单，耗时短，得率高，易规模化生产；采用高压层析柱，上样量大，生产周期短，分离度好，产品纯度高；采用超临界CO₂抗溶剂结晶，所析晶体纯度高，无需喷雾干燥等耗能工序，具有工序简单、环境污染小、产品品质好等优点。

 

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

以土木香的根为原料，放入高速组织捣碎机，在转速为18000rpm条件下保持5min后，过40目筛备用，称取1kg，按照料液比1:10（g/ml）的比例加入85%乙醇水溶液后，再加入0.3%的纤维素酶，在超声功率600W、48℃条件下酶解50min，得到酶解原料，加入闪式提取器中，提取电压为160V，提取时间为8min，进行闪式提取，过滤得到提取液，提取液浓缩干燥后得到粗提物，用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶（硅胶目数为200目）柱层析纯化，耐压35MPa，柱内径为250mm，层析柱径高比为1：10，氯仿-甲醇按体积比为1:1、1:5、1:13梯度洗脱，收集异别土木香内酯流分，将流分浓缩至有少量晶体析出，置于超临界CO₂结晶釜中，控制结晶压力12MPa，温度35℃，进行超临界CO₂抗溶剂结晶，结晶时间为60min，停机后取出结晶产物，含量为93.5%。

 

实施例2：