[发明专利]一种测定儿童血浆中维生素A的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定儿童血浆中维生素A的方法；属于分析及测量控制技术领域。

背景技术

利用维生素A分子中具有共轭多烯醇的侧链结构，在325～328nm的范围内有紫外最大吸收，用于含量测定。样品处理方法简便与快速:经液液萃取后经氮气蒸发，能满足临床快速测定儿童血浆中维生素A含量需求。

发明内容

取儿童血浆200μl，加入140μl甲醇和异丙醇(v/v，8∶2)，涡旋30s后，加入1000μl正已烷，涡旋1min，室温高速离心2min(12000×g)，取上清液700μl，吹干后甲醇100μl复溶。色谱条件:色谱柱为BEHC18柱(50mm×2.1mm，1.7μm;Waters公司);流速为0.3ml·min－1;流动相为甲醇－水(90∶10);柱温为30℃;进样量:5μL;检测波长为325nm。结果:血浆中维生素A色谱峰分离良好，无干扰，维生素A曲线为y=118296x+11644，Ｒ2=0.9997，回收率在90－120%;

其操作步骤如下：

（1）操作流程：首先，选取设备及试剂；其次，样品测定；最后，得出结论；（2）设备及试剂选取控制：Waters－ACQUITY－UPLC超高效液相色谱仪(Waters，美国)，Empower数据处理系统，Sar－toriusBT125D电子天平(德国赛多利斯仪器系统有限公司)，MULTIFUGEX1Ｒ超高速离心机(Thermo，美国)，XW－80A涡旋混合器，对照品(中国药品生物制品检定所，批号:100138－200603)色谱纯(美国Fisher公司)，自制超纯水，水机(PUＲELABELGA公司，英国)；②色谱条件:色谱柱为BEHC18柱(50mm×2.1)；（3）具体实施方式：①储备液的配制取VitaminA对照品约5mg，精密称定，置50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得浓度约为1000mg·L－1的储备液。②血样预处理：取血浆200μl，加入140μl甲醇和异丙醇(v/v，8:2)，涡旋30s后，加入1000ul正已烷，涡旋1min，室温高速离心2min(12000×g)，取上清液700μl，吹干后甲醇100μl复溶，要求不受血浆中内源性杂质的干扰；③线性关系和线性范围：取空白血浆200μl共6份，分别加入不同浓度VitaminA50μl，配成浓度为50，100，200，400，800，1000μg/L溶液，按“3.2血样预处理”操作，以浓度与峰面积作线性回归，得标准曲线方程。y=3739.5x+3073.5，Ｒ2=0.9996，线线性范围为50～1000μg/L;（4）具体实施例：该方法临床应用检测了300例正常儿童血浆，维生素A浓度于临床相符，测定值在300～802μg/L之间。