[发明专利]一种特异性识别克诺罗杆菌的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物学和免疫学领域，更具体地，本发明涉及一种特异性识别克诺罗杆菌的单克隆抗体及其应用。

背景技术

克诺罗杆菌(原称阪崎肠杆菌)是婴幼儿乳制品中的重要致病菌，能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和茵血症，造成严重的后遗症和死亡，死亡率高达50％以上，成人感染则症状轻微。目前尚不清楚克诺罗杆菌的污染来源，许多病例报告表明婴儿配方粉是目前发现的主要感染渠道。

克诺罗杆菌是一种属革兰氏阴性、不会形成孢子而呈棒状的细菌，属肠杆菌科，最适宜在37至43℃之间生长。除了奶粉外，克诺罗杆菌还被从不同环境和食物中分离出来，如水、温泉、水稻种子、啤酒杯、咸肉等等。

因此，准确地鉴定克诺罗杆菌对于食品检测业而言是很重要的。现有技术中，已经开发了一些针对克诺罗杆菌的抗体，并建立了一些检测方法，包括常规生化鉴定、PCR测定、血清学检测方法等。

目前检测克诺罗杆菌的方法主要通过常规生化鉴定和PCR测定其16S RNA。这些检测方法耗时较长，对检验员的要求较高，假阴性较高。PCR法检测则费用昂贵，对仪器设备及检测环境的要求很高。血清学检测成本低廉，易于操作；但血清学检测的缺点是易产生交叉反应，不适合作为独立的检测方法应用。

并且，克诺罗杆菌有很多的种或亚种)，现有的检测抗体(多为多克隆抗体)往往难以准确地对多种种或亚种)发挥识别作用。

综上，本领域迫切需要找到能够特异性识别克诺罗杆菌多种亚型或亚种，但与克诺罗杆菌以外的其它菌株没有交叉反应的特异性检测抗体。以用于进一步开发克诺罗杆菌的快速、准确、灵敏的检测方法，控制食源性致病菌感染，以及用于研究克诺罗杆菌流行病学。

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异性识别克诺罗杆菌的单克隆抗体及其应用。

在本发明的第一方面，提供一种单克隆抗体，其是由保藏号为CGMCC NO.7808的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。

在本发明的另一方面，提供所述的单克隆抗体的用途，用于制备特异性检测克诺罗杆菌的检测试剂盒。

在一个优选例中，所述的克诺罗杆菌包括：ATCC 29544、DSM 18702、DSM18703、DSM 18705、DSM 18706、DSM 18707、ATCC51329、CGMCC10403-22、CGMCC10403-23、NCTC9529、CGMCC 10419、CGMCC 10439、CGMCC 10456、CGMCC 10457、CGMCC 10462、CGMCC 10468、CGMCC 10473、CGMCC 10483、CGMCC 30417、CGMCC 30418。

在另一优选例中，所述的检测克诺罗杆菌包括：(1)定性检测克诺罗杆菌；或(2)定量检测克诺罗杆菌。

在本发明的另一方面，提供一种杂交瘤细胞株，其在中国普通微生物菌种保藏管理中心的保藏号是CGMCC NO.7808。

在本发明的另一方面，提供一种用于检测克诺罗杆菌的测试条(如试纸或试纸条)，其包括固相载体，以及附着于所述固相载体上的所述的单克隆抗体。

在一个优选例中，所述的测试条是免疫胶体金测试条。

在本发明的另一方面，提供一种制备包含所述的单克隆抗体的免疫胶体金测试条的方法，所述方法包括：所述的单克隆抗体以1～4mg/mL(如2mg/ml)的包被浓度，点到硝酸纤维素膜上，羊抗鼠二抗以0.8-1.2mg/ml作为Control线点到硝酸纤维素膜上；干燥；将单抗标记为标记量10-11μg、OD值23-27的金标溶液，选择喷量为2.5-3.5μL/cm点到聚酯膜上干燥的金标条，组合上pH3-4样品垫制成试剂条；采用pH7.4含1.5％非离子型聚氧乙烯(20)油醇的0.05M PBST缓冲液作为样品缓冲液。

在本发明的另一方面，提供一种检测克诺罗杆菌的试剂盒，其中包括所述的单克隆抗体或所述的杂交瘤细胞株。

在一个优选例中，所述的试剂盒中还包括：第二抗体，固相载体；较佳地，所述的单克隆抗体包被于所述的固相载体；较佳的，所述的第二抗体还连接有标记物。

在另一优选例中，所述的试剂盒中还包括：

与标记物相对应的底物；

显色剂；

洗涤液；和/或

终止液。

在本发明的另一方面，提供一种检测克诺罗杆菌的试剂盒，其中包括所述的测试条。