[发明专利]一种控制桡足类携带的总细菌数的方法

说明书

技术领域

本发明属于蛭弧菌技术领域，特别涉及一种控制桡足类携带的总细菌数的方法。

背景技术

桡足类(Copepoda)，隶属于节肢动物门、甲壳纲、桡足亚纲。为小型甲壳动物，体长＜3mm，营浮游与寄生生活，分布于海洋、淡水或半咸水中。桡足类活动迅速、世代周期相对较长，同样与其一样作为水产养殖中应用的饵料的还有桡足类和枝角类。桡足类作为水生有益浮游生物具有十分重要的意义。其不但是各种经济鱼类，如鳙、鲱、鲐和各种幼鱼、须鲸类的重要饵料，还可以作为渔场的标志，有些鱼类专门捕食桡足类，所以桡足类的分布和鱼群的洄游路线密切相关。有些桡足类的产量很大，如挪威沿海水域直接捕捞飞马哲水蚤可以作为人类、家畜和家禽的食料，具有很高的营养价值。同时其还可以作为水体污染的指示生物。但是，桡足类的体长较大，形态结构较为完整，是许多种类细菌的中间宿主。如果桡足类自身携带过多细菌，那么将对桡足类自身的生存及在水产养殖中的应用造成巨大影响及危害。总细菌数目过多，潜在的致病菌存在的可能性也就更大，其中可能存在的致病菌的种类和数目也会增加，会给对用其作为饵食的水产生物幼体造成病害。养殖户在水产生物育苗的过程中，会对引入的桡足类等饵料进行简单的过滤，或对其施用消毒剂以达到消毒的目的，这不但影响了桡足类的活性、可能还会引入新的细菌，更有可能在一定程度上杀死桡足类等浮游生物，同时破坏了养殖的水生生态环境，对水产生物的育苗产生不利影响。

因此，在使用桡足类作为优质饵料对水产生物育苗时，都应当对于其中携带的全部细菌引起重视。国内的许多研究都致力于将蛭弧菌制剂应用于控制病原菌，利用蛭弧菌天然的生物裂解活性，将蛭弧菌制剂施用于水体当中，可有效控制水体中的总细菌数目，从而降低其对于水产生物造成侵害的可能，从源头上控制水产生物病害的发生。目前将蛭弧菌制剂应用于控制水生浮游生物桡足类所携带的的总菌尚无报道。为了有效保障养殖水体及活生物饵料桡足类等的安全性，简单的消毒处理方式已无法满足需求。

应用蛭弧菌制剂控制桡足类所携带的的总菌，从源头上对水产养殖中存在的可能致病细菌进行防控，以形成具有疾病防预功能的养殖生态系统，具有十分重要的意义。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种控制桡足类携带的总细菌数的方法。该方法创新性提出了一种蛭弧菌制剂在控制有益浮游生物桡足类所携带的总菌的方式；并可以适当的延长其制剂中的菌体活性。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种控制桡足类携带的总细菌数的方法，包括以下步骤：

(1)制备蛭弧菌稀释液；

(2)将步骤(1)制备的蛭弧菌稀释液与保护剂进行混合，即得到蛭弧菌制剂；

(3)含桡足类(Copepoda)的水样的预处理；

(4)将步骤(2)蛭弧菌制剂与步骤(3)的含桡足类的水样进行混合。

所述的蛭弧菌优选为蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDS02，为2009年8月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M209170；对所述的蛭弧菌进行进行负染后于电子显微镜下观察形态可知：BDS02呈单细胞，弧形，大小为0.65×0.2μm，端生鞭毛，鞭毛长度为1.8μm；所述蛭弧菌BDS02用双层平板培养的方法于28℃培养四天可形成直径1～2mm的透明圆形噬菌斑；

所述的蛭弧菌稀释液优选通过以下步骤获得：

①宿主菌浓缩液的制备：挑取大肠杆菌单菌落(大肠杆菌E.coli，购于广东省微生物所菌种保藏中心，编号为GIM1.355)，接种于营养肉汤液体培养基中，培养，得到培养液，然后将培养液离心，弃上清，每100mL培养液收集的沉淀用2～3mL DNB(diluted nutrient broth)液体培养基悬浮，得到宿主菌浓缩液，4℃保存备用；

②蛭弧菌稀释液的制备：按照蛭弧菌：宿主浓缩液：DNB液体培养基的体积比1:1:50的比例进行混合，恒温培养，每24h添加一次宿主浓缩液，培养48h，得到培养液；将培养液离心，取上清液过滤，滤液使用质量体积比(g/mL)1.5％盐度的灭菌蒸馏水调整其浓度，制备得到2×10²～2×10⁵PFU(plaque-formingunit)/mL的蛭弧菌稀释液；

所述的蛭弧菌优选为蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDS02，为2009年8月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M209170；