[发明专利]一种用于新药物开发的免疫毒性评价方法

权利要求书

1.人外周血单个核细胞在重组蛋白质新药物的免疫毒性评价中的应用，包括以下步骤：

（1）制备人外周血单个核细胞；其中，新鲜血浆用RPMI-1640稀释2倍后，再与淋巴细胞分离液以2:1比例进行密度梯度离心分离人外周血单个核细胞；

（2）用对照药品和待测新药物处理步骤1所获得的人外周血单个核细胞；其中，培养的血清浓度在10%-20%范围之间；

（3）分别用CCK-8法和CFSE染色法检测步骤（2）获得的人外周血单个核细胞中的T细胞增殖；其中人外周血单个核细胞中的T细胞增殖的培养时间为24，48 和72小时；

（4）用流式细胞术测定步骤（2）获得的人外周血单个核细胞中的T细胞亚群CD4+和CD8+；

（5）用CBA试剂盒和BD流式细胞仪人检测步骤（2）获得的外周血单个核细胞与免疫毒性相关的细胞因子。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述新药物是植物源重组蛋白新药物。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述新药物是植物源重组人血清白蛋白。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤（1）包括，以密度梯度离心法从血浆样本中分离人外周血单个核细胞,再用含有10%热灭活的胎牛血清以及0.5%青链双抗的RPMI-1640培养基重悬浮。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述步骤（1）包括: 以密度梯度离心法，用Ficoll-Paque 从血浆样本中分离人外周血单个核细胞，再用含有10%热灭活的胎牛血清以及0.5%青链双抗的RPMI-1640培养基重悬浮，经台盼蓝染色检测活力大于95%的分离的人外周血单个核细胞即用于后续试验研究。

6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤（2）包括将所述人外周血单个核细胞于1倍和5倍剂量的对照药品和待测药物中培养24-72小时。

7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤（5）所述细胞因子选自与免疫抑制相关的白介素4和白介素10。

8.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤（5）所述细胞因子选自与炎症反应相关的干扰素和肿瘤坏死因子α。