[发明专利]胶原蛋白VI疫苗预防动脉粥样硬化

说明书

本发明公开了氨基酸组成为SEQ ID NO.1—SEQ ID NO.7中任一种多肽，以及该多肽作为动脉粥样硬化相关抗原，可用于制备治疗动脉粥样硬化的疫苗。本发明利用一种新的多肽，特别是胶原蛋白VI的COL6A5(SEQ ID NO.1)、COL6A6(SEQ ID NO.2)片段作为抗原，免疫受试对象，从而达到治疗动脉粥样硬化的效果，对临床预防动脉粥样硬化具有重要意义。

技术领域

本发明涉及医学领域，特别是涉及一种胶原蛋白肽段预防和治疗动脉粥样硬化的应用。

背景技术

动脉粥样硬化是一种慢性、渐进性的动脉疾病，主要临床表现为血管中脂质沉积后血液流通受阻，进而部分或全部中断，最终引起中风、心肌梗死等生命危象。存在于血液中的脂类则是能量储存以及某些组织激素合成所必需的成分，当血液中的脂肪含量增加时，血流速度减慢，动脉壁上脂肪条纹逐渐形成，进而促使脂肪和胆固醇沉积并依附在平滑的动脉内膜上形成小结。小结下长出纤维化的瘢痕组织，加促钙沉积且逐渐演变为无法祛除的白垩状坚硬薄膜(即动脉粥样硬化斑块)。这层永久薄膜会阻碍动脉的正常扩张和收缩，从而减缓动脉内血流速度，逐渐形成血块，妨碍或阻止血液流经动脉。虽然该病的确切病因尚未确定，但是高血压，高脂血症，糖尿病以及吸烟史均已被证实为重要的致病因素。

近年来人们发现动脉粥样硬化同时还是一种多因素作用的自身免疫性疾病，它是由脂代谢失衡引起的一个慢性炎症性血管疾病，这个炎症反应是经过人体免疫系统精细调节的；免疫反应的初衷是要加速清除引起炎症反应的例如氧化的低密度脂蛋白(ox-LDL)、死亡细胞碎片及其毒性产物、暴露的血管基质蛋白(matrix)降解产物等，然而激活的免疫网络失衡、免疫耐受被打破，使得免疫反应成为促进动脉硬化的(pro-atherogenic)炎症反应，因此动脉粥样硬化已经被认为是一个自身免疫性疾病；随着免疫反应的保护作用被逐渐揭示，应用疫苗和抗体治疗已经在动物实验中得到证实。

Palinski等第一个应用氧化LDL免疫高脂血症的兔子动物模型。最初的目的是想看看ox-LDL激活免疫系统是否会加重疾病的发展，与预期恰恰相反的是，ox-LDL免疫的动物实际上是部分地得到了保护。这个观察的结果被后续的许多不同的动物模型实验证实，从而得到一个诱人的可能，就是用氧化LDL的抗原来制作动脉硬化的疫苗。然而，由于ox-LDL是一个复杂的分子颗粒，有许多的抗原成分，难以标准化操作，同时它还含有有害的抗原，因而氧化LDL本身不是一个好的疫苗选择。于是最近几年的大量努力工作就是试图从氧化LDL上找到真正能够诱导动脉保护免疫反应的抗原。

另一类氧化LDL的抗原是用蛋白水解醛(MDA)修饰的ApoB-100的肽段。ApoB-100是唯一与LDL始终联系在一起的蛋白。这些抗原有它的优势就是对氧化LDL的特异性，因为它们有独一无二的氨基酸顺序。抗原被MHC-II分子提呈通常是以12-18个氨基酸链的形式。Fredrikson等将ApoB-100等分为20个氨基酸为基本单位的多肽文库(共计302个多肽)，人工合成并通过动脉粥样硬化病人的血清，ELISA筛选相关肽段，阳性肽段制备疫苗免疫ApoE^-/-小鼠后发现，p45(661-680)可明显降低斑块面积达50％左右，同时在残存的斑块上巨噬细胞的数量降低，胶原蛋白的表达提高。免疫使得特异性的Ig G显著增高，但对Ig M的作用很小。Ig G的表达同时由Ig G2a转变为Ig G1，提示由Th1向Th2转变。

目前已经发现的动脉粥样硬化相关抗原包括ox-LDL,HSP65/60，β2-glycoproteinI(β2GPI)和纤维连接蛋白(fibronectin)，其中ox-LDL的疫苗和抗体研究已经接近或正在进行临床试验。