[发明专利]一种高产丙酸詹氏丙酸杆菌工程菌及其应用

权利要求书

1.一种高产丙酸的詹氏丙酸杆菌工程菌，其特征是，过量表达来自肺炎克雷伯氏菌的苹果酸脱氢酶基因mdh。

2.根据权利要求1所述的工程菌，其特征是，同时还共表达了来自肺炎克雷伯氏菌的甘油脱氢酶基因gldA。

3.根据权利要求1或2所述的工程菌，其特征是，苹果酸脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.根据权利要求2所述的工程菌，其特征是，甘油脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

5.根据权利要求1或2所述的工程菌，其特征是，以詹氏丙酸杆菌(Propionibacterium jensenii)JN926 CCTCC NO:M 2013071为宿主。

6.根据权利要求1或2所述的工程菌，其特征是，以质粒pZGX04为表达载体。

7.一种构建权利要求1或2所述工程菌的方法，其特征是，将目的基因片段通过平末端连接克隆入质粒pZGX04，构建好的重组质粒转入詹氏丙酸杆菌，经筛选验证得到相应基因过量表达的重组菌。

8.一种应用权利要求1或2所述工程菌生产丙酸的方法，其特征是，将在32℃厌氧瓶中静置培养48h的种子转入装有发酵培养基的发酵罐中，于32℃、200rpm条件下培养，在60-132h之间以3.33mL/h恒速流加浓度为300g/L的甘油溶液，间歇通氮气。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述种子的培养所用种子培养基组成为：乳酸钠10g，酵母粉10g，胰蛋白胨大豆肉汤10g，pH7.0，溶于1L水中。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基组成为：酵母粉10g，胰蛋白胨大都肉汤5g，K₂HPO₄ 2.5g，KH₂PO₄ 1.5g,甘油30g，CoCl₂ 8mg，ZnSO₄ 8mg，MgSO₄ 8mg，pH7.0，溶于1L水中。