[发明专利]一种夜蛾颗粒体病毒、含该病毒的制剂的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种病毒、含该病毒的制剂的制备方法及应用，尤其涉及夜蛾颗粒体病毒、含该病毒的制剂的制备方法及应用，属于生物技术领域。

背景技术

半个多世纪以来，用化学农药防治害虫对农业增产增收作出了巨大贡献。但长期依赖和大量使用化学农药所带来的环境及农产品污染、生态失衡以及食品安全等问题也日益显现。减少使用高毒高残留农药，并推广无公害生产或防控技术就成了当务之急，害虫的生物防治也就显得尤为迫切。寄生于农业害虫的病毒巳发现约200余种，其中大多数属于杆状病毒，少数是颗粒体病毒，由于昆虫病毒有高度的专一寄生性，通常一种病毒只侵染一种昆虫，而对他种昆虫和人无害，因此不干扰生态平衡，已有小规模商品化生产的病毒杀虫剂，多数用于防治鳞翅目害虫，例如棉铃虫舞毒蛾斜纹夜蛾天幕毛虫菜粉蝶等，我国在80年代巳广泛试验推广核型多角体病毒杀虫剂。现有生物制剂的缺陷是宿主窄、致病慢、效果差、病原体易受光照影响而药效期短，其次制剂不耐40度以上高温贮存、货架期短会失去防效。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对现有技术存在的缺陷，提出一种夜蛾颗粒体病毒，该颗粒体病毒可使三种或三种以上的夜蛾幼虫致病死亡，俗称为夜蛾颗粒体病毒。如银纹夜蛾、烟青虫、小莱蛾、钭纹夜蛾等、含该病毒的制剂的制备方法及应用，安全高效地防治害虫。

本发明首先提供夜蛾颗粒体病毒GXW9-3，于2013年9月20日保藏在中国武汉大学(中国典型培养物保藏中心)其保藏号为CCTCC NO:V201340。

夜蛾颗粒体病毒Mamestra oleracea granulosis virus GV GXW9-3隶属于杆状病毒科颗粒体病毒属，是一种双链ＤＮＡ包涵体病毒。在JSM-7001F扫描分析电镜下研究发现，包涵体病毒呈折光性的颗粒，呈圆形，大小为320ｘ189ｎｍ，内部含有一个病毒粒子，病毒粒子分子量为85.9KB的DNA和蛋白质外壳组成，病毒的感染力主要由DNA和蛋白衣壳的完整性决定的，病毒粒子外包裹了致密的晶格的颗粒体蛋白，形成病毒包涵体。

本发明将夜蛾颗粒体病毒GXW9-3接种于高龄夜蛾幼虫食料中让其捕食致幼虫细胞病变，而在24h～32h搜集的罹病尸体经体表75％酒精消毒后粉碎创制高含量的颗粒体颗病毒GXW9-3制剂，具体的制备方法如下：

第一步、将野外与室内交替繁育的幼虫喂食夜蛾颗粒体病毒GXW9-3，当野外繁育的幼虫为3～5龄时开始接夜蛾颗粒体病毒GXW9-3；当室内工厂化繁育的3～5龄幼虫斜纹夜蛾禁食3.5～4.5小时，再将夜蛾颗粒体病毒GXW9-3混入饲料中，搅拌均匀，喂食幼虫，保持环境温度28～38℃，光照强度2500-3000Lux，相对湿度70～75％，待幼虫细胞病变；

第二步、在幼虫细胞病变的24～32小时内收集具有急剧痉挛反应、后足指尖插入植物顶部组织或叶缘叶肉组织而倒挂死亡幼虫尸体，将幼虫尸体经体表酒精消毒后，待80％以上的尸体体表破裂流出乳白色的浓稠液体后，将幼虫尸体粉碎至粒径在75nm以上；

第三步、将粉碎出的幼虫体液制成大于110亿OB/mL的夜蛾颗粒体病毒GXW9-3制剂。

所述第一步中，选择野外或室内繁育的幼虫。幼虫包括银纹夜蛾、烟青虫、小莱蛾、菜青虫、斜纹夜蛾、稻螟虫或粘虫的幼虫，交替繁育的步骤是室内工厂化繁育斜纹夜蛾等夜蛾昆虫5代后，以保持毒力效价的稳定，再将斜纹夜蛾等夜蛾昆虫移至室外寄主作物上繁殖1代，所述夜蛾颗粒体病毒GXW9-3的加入量为每百斤饲料接入干燥GXW9-3菌株100g。所述步骤三中粉碎方式为砂磨粉碎。

本发明进一步提供含有夜蛾颗粒体病毒的制剂的应用，将所述夜蛾颗粒体病毒GXW9-3制剂用清水稀释500-600倍液后加入8mL的农用有机硅制成悬浮液，在晴天的傍晚将悬浮液喷施于植株上即可。

优选的喷施条件是28-38℃、光照强度2500-3000Lux，相对湿度65％～85％的环境下喷施，防治效果可达100％，持效期达到60天以上。